Fungal DNA Kit 真菌DNA小量提取试剂盒 Om

D3390 Fungal DNA Mini Kit
√实验前请按说明书正确配制和保存以下溶液。
 使用【无水乙醇】对 DNA Wash Buffer 进行稀释，稀释后室温保存。货号 加入量D3390-00 8mL
D3390-01 80mL
D3390-02 100mL（每瓶）A. 真菌干样品 DNA 操作方案
1. 加入 10-50mg 组织干粉，加入 800μl FG1 Buffer，摇匀重悬，确定重悬。建议：一次操作可以做 4~6 管样品：研磨后，加入 FG1 Buffer，进行第2 步操作然后再进行第批样品处理，每管样品不要超过 50mg 干组织。

2. 65℃水浴 10min，在此期间 2 次摇匀。
3. 加 180μl FG2 Buffer，涡旋混匀，冰浴 5min，10000xg 离心10min。

4. 将上清液移入新的离心管内，小心不要碰到沉淀，加 0.7 体积的异丙醇混匀，这一步可以去掉很多脂类和杂质，也可以增加 DNA 同柱子的结合率。注意：在大多数情况下，这一步很容易就能得到 700μl 上清，这将需要490μl 异丙醇。值得注意的是：由于样本的不同，上清的体积也可能不同。所以，在把上清转移至一个新的管之后，要测量一下上清液的体积，加入合适量的异丙醇。

5. 立即 10000xg 离心 2min，长时间离心不会增加产物。
6. 小心弃上清，小心不要碰到沉淀。将离心管倒扣在吸水纸上1min。

7. 加 300μl 无菌水，65℃水浴，摇匀溶解沉淀。加 4μl RNase A 混匀。

8. 加 150μl FG3 Buffer 和 300μl 无水乙醇，轻轻摇匀，假如出现沉淀颗粒，可以用注射器或移液枪吹散。
9. 把 HiBind
® DNA 柱套在 2ml 收集管中（已提供），将溶液过柱，室温10000xg离心 1min，去滤液。
10. 将 HiBind
® DNA 柱重新套在 2ml 新的收集管中，加 750μl DNA Wash Buffer（含乙醇），室温 10000xg 离心 1min，去滤液。
注意：使用 DNA Wash Buffer 前必须按照说明书加入无水乙醇稀释。

11. 重复步骤 10，用 DNA Wash Buffer 再次洗涤。
12. 将 HiBind
® DNA 柱重新套回到收集管中，室温 10000xg 离心2min 空甩干燥。

13. 将 HiBind
® DNA 柱套入到新的 1.5ml 离心管，加 50-100μl Elution buffer，65℃或室温放置 3-5min。室温 10000xg 离心 1min 洗脱 DNA，少体积可以提高质量，但降低产量。不推荐使用 200μl 以上进行洗脱。

14. 重复步骤 13 进行二次洗脱。
提示：增加洗脱液和洗脱前 65-70℃放置 5min 可以增加产量。

15. 将 DNA 保存至-20℃。
B. 真菌新鲜/冷冻样品 DNA 操作方案
1. 将 100mg 样品加入到 1.5mL 或 2mL 离心管中；
2. 加入 600μl 的 FG1 Buffer，涡旋混匀，确保所有的组织团都分散均匀；建议：一次操作可以做 4~6 管样品：研磨后，加入 FG1 Buffer，进行第2 步操作然后再进行第批样品处理，每管样品不要超过 200mg 干组织。

3. 65℃水浴 10min，在此期间 2 次摇匀。
4. 加 140μl FG2 Buffer 摇晃混匀，冰浴 5min，10000xg 离心10min。

5. 将上清液移入新的离心管内，小心不要碰到沉淀，加入 0.7 体积的异丙醇混匀，这一步可以去掉很多脂类和杂质，也可以增加 DNA 同柱子的结合率。

6. 立即 10000xg 离心 2min，长时间离心不会增加产物。
7. 小心弃上清，小心不要碰到沉淀。将离心管倒扣在吸水纸上1min。

8. 加入 300μl 无菌水加热至 65℃，摇匀溶解沉淀。加入 4μl RNase A，涡旋混匀。

9. 加入 150μl FG3 Buffer 和 300μl 无水乙醇，轻轻摇匀，假如出现沉淀颗粒，可以用注射器或移液枪吹散。
10. 把 HiBind
® DNA 柱套在 2ml 收集管中（已提供），将溶液过柱，室温10000xg离心 1min，去滤液。
11. 将 HiBind
® DNA 柱套入到新的 2ml 收集管，加 750μl DNA Wash Buffer（含乙醇），室温 10000xg 离心 1min，去滤液。
注意：使用 DNA Wash Buffer 前必须按照说明书加入无水乙醇稀释。

12. 重复步骤 11，用 DNA Wash Buffer 再次洗涤。
13. 将 HiBind
® DNA 柱套回到 2mL 收集管中，室温下 10000xg 空甩离心2min；

14. 将 HiBind
® DNA 柱套入到新的 1.5ml 离心管，加入 50-100μl 65℃预热的Elutionbuffer，室温放置 3-5min。室温 10000xg 离心 1min 洗脱 DNA，少体积可以提高质量，但降低产量。不推荐使用 200μl 进行洗脱。
15. 重复步骤 14 进行二次洗脱 DNA。
提示：增加洗脱液和洗脱前 65-70℃放置 5min 可以增加产量。16. 将 DNA 保存至-20℃。

C. 真菌样品 DNA 简短操作方案
1. 收集样品于离心管内，加入 600μl FG1 Buffer 和 5μl RNase (20mg/ml），涡旋混匀，静置 1min，加入 10μl β-巯基乙醇，涡旋混匀。
2. 65℃水浴 5min，在此期间 1 次摇匀。
3. 加 140μl FG2 Buffer 摇晃混匀，冰浴 5min，10000xg 离心10min。4. 小心吸取 600μl 上清液到新的离心管中，不要碰到沉淀。加入0.5 倍体积的FG3Buffer 和等体积的无水乙醇，涡旋混匀。
提示：如果出现沉淀颗粒，可以用注射器或移液枪吹散
5. 将 HiBind
® DNA 柱套在 2ml 收集管中（已提供），转移 800μl 步骤4 中混合液到柱子中，室温下 10000xg 离心 1min，去滤液。
6. 重复步骤 5 直至将所有混合液全部过柱；
7. 将 HiBind
® DNA 柱套入到新的 2ml 收集管，加 750μl DNA Wash Buffe（r 含乙醇），室温 10000xg 离心 1min，去滤液。
注意：使用 DNA Wash Buffer 前必须按照说明书加入无水乙醇稀释。8. 重复步骤 7，用 DNA Wash Buffer 进行二次洗涤；
9. 将 HiBind
® DNA 柱套回到 2ml 收集管，室温下 10000xg 空柱子离心2min。10. 将 HiBind
® DNA 柱套入到新的 1.5ml 离心管，加入 50-100μl 65℃预热的ElutionBuffer，室温放置 3-5min 溶解 DNA。室温 10000xg 离心 1min 洗脱DNA，少体积可以提高质量，但降低产量。不推荐使用 200μl 以上进行洗脱。11. 重复步骤 10 进行二次洗脱 DNA。
提示：增加洗脱液和洗脱前 65-70℃放置 5min 可以增加产量。12. 将 DNA 保存至-20℃。
D. 真菌样品真空/旋转 DNA 操作方案
注意;开始前请阅读使用说明书和真空设备操作说明
1. 干的或湿的样品处理方法参照前面实验，然后 DNA/FG3/Ethanol 混匀过柱。2. 样品溶液过柱后关掉真空设备。
3. 加 750μl DNA Wash Buffer（含乙醇）洗涤，打开真空设备，溶液过柱后再加750μl DNA Wash Buffer（含乙醇）洗涤，打开真空设备。
4. 弃掉 2ml 收集管，空甩或者风干柱子。
5. 柱子装在 1.5ml 离心管上，加 100μl Elution Buffer，放置3-5min，离心1min洗脱 DNA。