- ￥480
- LABLEAD
- 北京
- AL0010-10G
- 2026年02月21日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温
- 英文名：
Low Metling Agarose
- 供应商：
LABLEAD
- 规格：
10G
储存条件：常温
产品描述
琼脂糖（Agarose）是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体，提取自琼脂或者含琼脂的海藻，结构上是一种线性聚合物，由β-D-吡喃半乳糖（1-4）连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基构成。作为一种凝胶试剂，常用于通过凝胶电泳或者印迹法（如Northern或Southern）来进行日常核酸分析，也适用于蛋白应用，如辐射状免疫扩散（RID）实验。
琼脂糖的基本参数，包括：1）硫酸盐含量，琼脂糖的纯度指标；2）凝胶强度，指施加于凝胶使之断裂的外力；3）胶凝点，指水溶性琼脂糖溶液冷却后形成凝胶时的温度；4）电渗（EEO），一种液体穿透凝胶的一种电动运动，会干扰分离效率。
低熔点琼脂糖（Low melting point agarose）是经过改良使得成胶温度和熔点更低的琼脂糖，相比于常规琼脂糖，分子筛特性更好，条带清晰度更高。非常适用于分子量大于1000 bp核酸的分离以及电泳后核酸片段的回收（因其约在65.5°C熔化，几乎低于所有核酸分子的熔点）。低熔点琼脂糖凝胶电泳纯化回收的DNA胶条重熔后，可以直接用于制备放射性同位素标记的DNA探针。限制性酶切核酸片段经低熔点琼脂糖凝胶电泳分离后，切胶回收的核酸胶条重熔后也可以非常方便的直接克隆到质粒中。本品也适用于组织培养细胞的克隆和病毒空斑实验。
正确的加热方式对琼脂糖的充分溶解和凝结至关重要，在此，我们提供以下几点作为正确制备琼脂糖凝胶的操作参考。l
(1)琼脂糖加热溶解所需时间短。
(2)琼脂糖在TAE或者TBE缓冲液中不溶解，加热时，琼脂糖颗粒水化形成溶液，水化是时间依赖的，不同的琼脂糖水化点不同。琼脂糖纯度高，超微颗粒，非常适合作为电泳实验载体。对比于其他的琼脂糖，琼脂糖水化速度快，使用者无需煮沸过长时间，否则易导致胶液浓稠，不利于混匀，凝胶后易破损。
琼脂糖凝胶制备
用1×TBE溶液配制1%浓度琼脂糖凝胶
1.用于制备胶液的锥形瓶体积应为胶液体积的2-4倍，缓慢向缓冲液中加入琼脂糖，边加边
搅拌，防止琼脂糖聚集。记录瓶体和溶液总重量。
2.微波炉高火加热30s，根据配制的溶液体积调整加热时间。加热时间与微波炉、瓶体大小和琼脂糖浓度有关。
3.摇匀琼脂糖溶液。
4.再次高火加热30s，摇匀琼脂糖溶液。
5.将溶液再次放回微波炉，高火加热至沸腾（大约10-35s）。接触移动时琼脂糖胶液可能会剧烈沸腾，小心操作，避免烫伤。从微波炉拿出后，室温冷却1-2min，轻轻摇晃使液体里的气泡溢出。
6.重新放回微波炉，高火加热，使之沸腾约15s，观察琼脂糖的溶解状态，如果仍有颗粒存在，重复该步骤直至所有晶体全部溶解。
7.待琼脂糖完全溶解成液体，重新称量总重量，计算蒸发液体量，用水补齐至原始重量，摇匀液体。
8.建议胶液冷却至50-55°C时灌胶，有利于凝胶孔径均匀一致，不至于损伤制胶仪。灌胶前轻轻摇晃琼脂糖溶液，释放胶液中残存的气泡。
9.向制胶槽中灌胶，一般胶的厚度3-5mm，灌胶后尽量排除梳孔之间或底部的气泡。
10.在室温放置（30-45min）使胶充分凝结。
如果要制备不同浓度和不同体积的凝胶，请注意以下两点：
1.在凝胶溶液煮沸前至少进行2次摇匀。
2.胶液沸腾后，每隔10-15s观察一次胶液溶解程度（间隔时间取决于胶液浓度和体积）。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本品仅用于实验研究。
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文献和实验（至少2 cm以上），在长波紫外灯下观察，用清洗过的刀片在目的片段前切下与目的片段同长，宽度适当（一般2 cm左右）的胶块。 注意： ①不要忘记在胶下垫一个新的塑料手套防止污染。 ②小心不要将回收胶切裂，同时注意与目的带相邻的切面要尽量平整。 3、将切好的回收胶块放在回收胶槽内，在切去胶块处加入低熔点琼脂糖胶，待其凝固后将其小心放回电泳槽继续进行电泳。小心低熔点琼脂糖凝胶块与原回收胶块的交界面易断裂。 4、待目的带完全进入低熔点琼脂糖
的影响，所以回收率并非是一成不变的。所以Qiagen以严谨的态度提供多种条件下的详细介绍：使用QIAquick回收之前和回收之后再混合的DNA 片段 (大小已指出) 。对所有尺寸的片段均获得了接近80％的回收率。A 1-5 : 回收之前; P : 回收之后再混合。样品使用 1.5% 琼脂糖凝胶分析(TAE buffer)。B 1-3: 回收之前; P : 回收之后混合。样品于 3.5% 高分辨琼脂糖凝胶上分析( TAE buffer)。M : pTZ-HinfI marker。记得《分子克隆II
，反应时间在1小时，而反应的终止则由EDTA 溶液的加入完成，因为它能鳌合核酸酶活性所必需的金属离子。 2、DNA的琼脂糖电泳 DNA的电泳有琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺电泳，它们是分离、鉴定和纯化DNA片段的标准方法。 DNA的电泳原理与蛋白质的电泳原理基本相同。DNA分子在电场中通过凝胶介质中而泳动，除电荷效应外，凝胶介质还有分子筛效应，与分子大小及构象有关。由于DNA分子或DNA片段的分子量差别，电泳后呈现迁移位置的差异。琼脂糖凝胶电泳所需样品量仅0.5~1ug
