SuperTOPFlash(报告基因质粒)

SuperTOPFlash(报告基因质粒)是用于检测Wnt信号通路中β-catenin介导的TCF/LEF转录活性水平的报告基因质粒。SuperTOPFlash是以碧云天的pGL6-TA为模板，在其多克隆位点插入8个重复的TCF/LEF结合位点序列(故也称作Super8XTOPFlash)，其检测TCF/LEF转录活性水平的灵敏度高于TOPFlash(D2501)。

Wnt信号通路是重要的信号通路之一，与干细胞多能性、胚胎发育、肿瘤的发生等都有着密切的关系。

Wnt信号通路的关键步骤是其关键因子β-catenin的稳定性及是否进入细胞核内，从而决定Wnt信号下游基因的表达。当细胞外缺少Wnt蛋白时，细胞浆内的β-catenin被招募到由APC及Axin等组成的降解复合物上，β-catenin被CK1α和GSK3β磷酸化，从而导致其与E3泛素连接酶β-TrCP的结合并进入泛素化和蛋白酶体依赖的降解途径。因此在非激活状态下，细胞浆内的β-catenin蛋白水平保持着较低的水平，而细胞核内LEF和TCF与Groucho结合抑制了Wnt调控的下游基因表达。当Wnt蛋白结合到受体复合物时，相应的信号通路就被激活。辅助受体LRP可以被CK1α和GSK3β磷酸化，Axin被招募到细胞膜上，因此β-catenin不能被磷酸化而被转运到细胞核内。在细胞核内β-catenin和TCF/LEF形成转录复合物，从而激活了Wnt信号通路下游的基因如c-Myc和cyclin D1等的表达。

碧云天将TCF/LEF结合位点克隆至含TA病毒最小启动子(minimal TA viral promoter)的萤火虫萤光素酶报告基因载体pGL6-TA中，构建得到SuperTOPFlash质粒。TCF/LEF转录活性水平与萤光素酶的表达量成正比，从而测定细胞内Wnt信号通路的激活水平。

SuperTOPFlash和TOPFlash(D2501)都被广泛应用于Wnt信号通路的研究，SuperFOPFlash(D2507)带有突变的TCF/LEF结合位点序列而作为SuperTOPFlash的阴性对照。

pGL6-TA是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进，一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达，同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。

SuperTOPFlash质粒的主要信息如下：

SuperTOPFlash质粒的图谱如下：

SuperTOPFlash质粒的TCF binding sites序列详细图谱见说明书：www.beyotime.com/Manual/D2505 SuperTOPFlash(报告基因质粒).pdf

SuperTOPFlash质粒中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut SuperTOPFlash)包括：

SuperTOPFlash质粒中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut SuperTOPFlash once)包括：

SuperTOPFlash质粒中推荐使用的测序引物序列如下：

RVprimer3(5687-5706)：

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SuperTOPFlash质粒的全序列信息:D2505Super8XTOPFlash全序列.txt

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本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

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