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文献和实验、260nm、280nm和310nm波长下读数,还可扫描动态吸收图谱。 三 结果与分析 1. 完整的RNA的甲醛电泳可明显地观察到28S和18S两条带(见图3.1),并且28S大约是18S的两倍宽。若两条带不明显, 则说明RNA部分降解,可能的原因是污染了RNase, 或操作剧烈。 2. 定量测定DNA或RNA,应选260nm、230nm、 280nm和310nm波长读数。其中260nm读数用来估算样品中核酸浓度,310nm为背景吸收值。1个OD260值相当于40μg/mLRNA。样品浓度(μg
混淆,各有其使用上的特色,不要互用。标准品及样本:标准品系列:使用小试管准备一组BSA (b) 标准品的系列稀释:◆ 配制一定要精准,否则校正直线不会很准确;各种试剂的添加,若自稀往浓取样,则可以不用换吸管头。未知样本:再以上述unknown BSA (c) 准备两种未知样本:Label 未知样本 (c) Buffer A-0 Final Conc.一般样本:1) 通常由色析法所收集到的各分划样本,都可以直接进行蛋白质定量分析;但若其中含有某些干扰因子 (如含有Triton),或样本的浓度
扩增曲线的分析攻略。 1、确认软件设置是否正确 对照试剂盒说明书,检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是,需要看下所选用的试剂中是否含有 ROX 来作为参比荧光染料。Applied Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪器可以用 ROX 来作为参比荧光染料,用以校正仪器系统以外的物理误差,比如均一化校正由于移液误差或者蒸发导致的批内体积误差等。目前市面上有的的荧光定量 PCR 预混液是不含有 ROX 的,当用此类试剂的时候,应该将 ROX 参比
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