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文献和实验鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames 试验,Salmonella Typhimurium / Reverse Mutation Assay)于 1975 年建立并不断发展完善,目前已被世界各国广为采用,已经成为毒理学实验室必需开展的重要实验项目。Ames 实验用于检测待分析物质的致突变作用,该验灵敏、高效、检测范围广。Ames 试验原理Ames 试验利用鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株,该缺陷型菌株不能合成组氨酸,故在缺乏组氨酸的培养基上,仅少数自发回复突变的细菌生长;假如有致突变物存在
人员造成的污染RNA酶最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此,在准备分离的和分析RNA的材料和溶液时,主有涉及RNA的一切操作过程中,都应戴一次性手套,接触“胖的”玻璃器皿和其他物品以后,手套就可能沾染上RNA酶,因此进行RNA实验时应勤换手套。(三)污染的溶液用高压灭菌的水和RNA研究专用的化学试剂配制溶液,用干烤过的药匙称取试剂,将溶液装入无RNA酶的玻璃器皿。可能的话溶液均应用0.1%DEPC于37℃至少处理12小时,然后于100℃加热15分钟或在15lbf/in2(1.034x105Pa
【共享】RNA抽提实验注意事项,以及各种RNA的抽体的常用方法及步骤,还有质量鉴定的几种方法
经稀释后紫外测定RNA提取量,其余30ml分装,-20℃保存备用。mRNA的分离 与rRNA和tRNA不同的是,哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾,因此可以用oligo(dT)-纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等,1971;At Leder,1972)。在构建cDNA文库时, 必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。进行Northern杂交或Sl 核酸酶作用图分析时,与总RNA相比,采用poly(A)+ RNA能获得更为满意的结果
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