插入式细胞培养器(Transwell小室),适用于6孔板,p

利用 Millicell 培养小室培养皮肤及肺类器官的实验方案

培养技术支持将人支气管上皮细胞从 16HBE14o-等细胞分化为成熟的肺表型。使用 ALI 细胞培养技术培养的支气管上皮细胞可以形成极化细胞层和紧密连接，并且可以分化和呈现功能性纤毛。ALI细胞培养方法依赖于 Millicella/Transwell插入式细胞培养小室来支持类体内观察到的假复层粘液纤毛表型的发展。 图 1. 在传统2D（左）与3D气液界面(ALI)（右）中培养的气道上皮细胞。 气液界面细胞培养方案 用ECM 混合物涂抹组织培养瓶：

细胞技术的热门话题：Transwell侵袭实验

因子，有战友将纤维粘连蛋白加入下层培养液作为趋化因子，但个人认为，FBS仍是最合适的。 ⑥ 细胞培养板： 常用于Transwell侵袭实验的细胞培养板有6孔板、12孔板、24孔板等，以24孔最常用。细胞培养板没什么特殊要求，普通的细胞培养板就可以。但要注意，细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套。 ⑦ 此外，膜的下室面可涂上纤维粘连蛋白(fibronectin，FN，Sigma有售)，这样做的目的是使穿过膜的细胞更好地附着在膜上，也可用胶原（collagen）或明胶

转染和转染效率测定步骤

清培养基。6. 在37℃，5％的CO2中保温24-48小时，无须去掉复合物或更换培养基或者在4-5小时后更换生长培养基也不会降低转染活性。7. 在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。贴壁哺乳动物细胞的DNA转染步骤此步骤专门设计使用LIPOFECTAMINE，LIPOFECTIN，DMRIE-C或CELLFECTIN试剂在6孔板转染