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云萃
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文献和实验IMPACT™-TWIN 蛋白纯化系统，可以不用任何蛋白酶，表达N-Cys的蛋白，一步过柱纯化。
在几丁质介质上。 图3：蛋白的环化：用pTWIN载体表达两端融合有Intein1和Intein2的目的蛋白，经裂解释放后产生N端的半胱氨酸残基和C端的硫酯键。 当蛋白构象导致其N端与C端接近情况下，能进行自我连接反应，从而形成通过肽键连接的环状蛋白质。 什么是内含肽（intein）？ 一段随功能蛋白一起表达，并在表达后可进行自剪接的多肽，它兼有蛋白酶和蛋白连接酶的特性，与内含子（RNA水平自剪切）的作用方式类似。 本系统的优势: 单柱一步纯化蛋白。 无需蛋白酶作用
strep-tag 对 Strep-Tactin XT的亲和力，大规模纯化 CB2 蛋白；然后通过 WB 检测 MBP-CB2 的表达情况，G 蛋白激活实验检测 CB2 的功能活性。 3、CB2 蛋白的纯化的策略：根据不同构建载体表达的情况及 Strep-Tactin 亲和力的测试，作者通过串联亲和层析对 CB2 蛋白进行纯化，分别使用 C 端 His10 和 N 端 twin-Strep-tag。首先使用 Ni-resin 进行第一步纯化后，再从含有 CB2 蛋白的粗提物进行透析，用 TEV 蛋白酶
后的目标蛋白产量范围在1.5-100mg/L。趋化因子和细胞因子可以得到高达30-100mg/L的产量。其它关于这些蛋白表达和纯化的有参考价值信息包括： ■ 植物磷酸烯醇式丙酮酸—羧化酶激酶（Ermolova 2003）——目标蛋白切除标签后用BDA（蓝色葡聚糖）亲和层析树脂纯化。纯化后蛋白的催化活性比未切除标签的融合蛋白高50倍。 ■ Xklp3a，Tep3Ag和E8R（De Marco 2004）——用蛋白酶切割后，His-融合的TEV和NusA被Ni2+离子亲和色谱选择性去除
