培养基方瓶（血清瓶） PETG无DNA/RNA酶

重组腺病毒构建、扩增及纯化

为recA+，质粒DNA易发生突变，DH5α或JM109，XL1-blue菌株为重组缺陷性菌株，可稳定扩增已鉴定的重组质粒），扩增细菌并纯化质粒。 三、重组病毒质粒转导293细胞 1、293细胞培养：转导24小时前，以方瓶为例，接种2×106  293细胞于25cm2方瓶，使生长密度约50-70%.（也可以使用6孔或96孔板） 2、以PacI单酶切重组病毒质粒（转导25cm2方瓶约需4ugDNA），完全线性化后，乙醇沉淀，再以20 ul ddH2O溶解。 3、脂质体包裹质粒

重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作

-DNA液，加入6ml DMEM完全培养基，37℃孵育过夜，再换液。 7  培养过程中观察细胞生长情况。约2周后可观察到细胞病变（CPE）出现（如用pAdTrack-CMV质粒，由于含GFP，可观察到绿色荧光）。 四 重组病毒鉴定 1  转导10-14d后，收集细胞沉淀，加入2ml灭菌的PBS混悬，冻融细胞，离心后收集上清保存于-80℃。 2  取30-50% 步骤1中上清，感染50-70%饱和度的25cm2 方瓶中293细胞。2-3d后出现明显细胞

肿瘤细胞体外传代培养及保种

一. 细胞复苏与培养 将液氮或- 80℃ 保存的肿瘤细胞于 37℃ 水浴，快速溶化，用 8.0ml 培养基混匀已融化的肿瘤细胞悬液，于 1500 转/ 分，离心 3 分钟。 弃上清，再吸取 8.0ml 培养基质混匀细胞沉淀，再 1500 转/ 分，离心 3 分钟，弃上清，细胞沉淀用 1.0ml 培养基混匀，备用。 另取一个 75cm2 方瓶，加入 14.0ml 培养基质，将上述制备的含 肿瘤细胞悬液(1.0ml)加入此方瓶中，于 37℃，5%CO2 孵育箱中培养。 若此肿瘤