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- 2025年07月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
冰冻
- 英文名：
Hydrocortisone Impurity H(EP)
- 库存：
100
- 供应商：
上海汇谱仪器有限公司
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文献和实验实验材料： 1. 动物子宫颈部穿刺或切除所得组织 2. 3T3成纤维细胞 3. 0.25%胰蛋白酶/EDTA 4. KCM：DMEM中添加10%FBS、0.5ug/ml氢化可的松和1×10-10 mol/L霍乱毒素 5. EGF：100ugEGF溶于1ml无菌的UPW中。按100ul分装，在-20℃条件下储存。用10ml的含有血清的培养液配制100ug/mlEGF工作液，按100ul分装，在4℃储存。使用时，用含有
）摇床100rpm消化1～3 h。5. 1000 rpm离心5min，去除漂浮的脂肪细胞及培养液。6 .沉积的细胞用红细胞裂解液[2]再次配成细胞悬液，37℃孵育10 min，以去除污染的红细胞。7. 150μm尼龙网过滤，Hanks液洗涤并离心2次，每次1000rpm,5min。注：第六步和第七步我做时省略了。8 .沉积的细胞用培养基A制成细胞悬液，调节浓度2×105/ml接种于培养瓶中。置37℃，体积分数5% CO2培养箱内孵育72hr后换液。9. 一周以后可以传代。细胞的分化 细胞贴壁72 h
（Schreiber et al.1991）。也可以DMEM作为基础培养基； 4. 化学限定性培养液：基础培养液为DMEM，添加HDL100μg/ml、转铁蛋白50μg/ml、胰岛素5μg/ml、氢化可的松2.7×10-7 mol/L、EGF 10ng/ml、硒25 ng/ml以及三碘甲腺原氨酸（T3 ）1×10-10mol/L（Schreiber et al.1991）； 5. 消化液：原代培养时，从胸腺组织制备细胞悬液时，所用的消化液为1mg/ml的胶原酶，用含有15%胎牛
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