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兔免疫组化检测试剂盒 IHC试剂盒

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  • ¥1186
  • 翌圣生物(Yeasen)已认证
  • 36312ES50
  • 上海
  • 2025年12月22日
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    • 英文名

      Immunohischemistry Kit for Rabbit Primary Antibody

    • 保质期

      一年

    • 供应商

      翌圣生物科技(上海)股份有限公司

    • 保存条件

      Part Ⅱ,H,I组分-20℃保存,其他组分4℃保存

    • 规格

      100T

    产品描述IHC Kit for Rabbit Primary Antibody可用于检测以兔单克隆或多克隆抗体为一抗的免疫组化实验,检测原理基于高特异性高亲和力的链霉亲和素-生物素结合:已固定或培养细胞的抗原与一抗形成抗原抗体复合物,生物素化二抗特异性结合上述复合物,经辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素特异性识别生物素(即抗原所在位置),最后经辣根过氧化物酶底物显色即可检测相应抗原。
    本品可适用于多种类型样本,如石蜡包埋切片、冰冻切片、培养细胞涂片及血液标本等。
    产品组分

     产品细节图片1
    组分 组分编码 组分名称 产品编号/规格 储存条件
    Part Ⅰ 36312-A 1×PBS 缓冲液(干粉,4L 2L×2 室温
    36312-B 100×柠檬酸钠抗原修复液 32 mL 2-8
    36312-C 内源性过氧化物酶阻断剂(即用型) 5 mL 2-8
    36312-D 抗体稀释液(即用型) 5 mL 2-8
    36312-E 封闭用正常山羊血清工作液(即用型) 5 mL 2-8
    36312-F 生物素标记羊抗兔 IgG(即用型) 5 mL 2-8
    36312-G 辣根酶标记链酶卵白素工作液(即用型) 5 mL 2-8
    36312-J 苏木素染液(即用型) 6 mL 室温
    Part Ⅱ 36312-H DAB kit (20×)显色液 0.5 mL -20
    36312-I DAB kit (20×)稀释液 0.5 mL -20
     
    运输和保存方法冰袋运输。Part ⅡH,I组分-20℃保存,其他组分4℃保存,有效期1年。勿冰冻!
    注意事项
    1.了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
    2.DAB是一潜在致癌物,使用时请注意自我防护。
    3.检测样本时需同时做阴性对照和阳性对照。
    4.产品仅作科研用途!
     
    准备试剂二甲苯、乙醇、甲醇、去离子水、封片剂(Cat#36313
    使用方法
    1.脱蜡水化:将石蜡切片置于新鲜二甲苯中浸泡15 min,重复三次。去除多余的液体后,依次置于无水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇,各浸泡5 min,蒸馏水(或自来水)冲洗5 min。用PBS缓冲液(试剂A,将干粉溶解于2 L去离子水中)冲洗切片5 min,重复三次。
    2.抗原修复:将脱蜡水化后的组织切片置于烧杯(或修复盒)中的耐高温塑料切片架上,加适量修复液柠檬酸钠抗原修复液(试剂B,将100×柠檬酸钠抗原修复液加去离子水稀释成柠檬酸钠抗原修复液),液面要浸过切片组织一定高度,将修复盒置于沸水中煮沸修复15 min后取出玻片,自然凉至室温。用PBS缓冲液冲洗切片5 min,重复三次。注意:抗原修复时,修复液务必保证切片始终浸泡在液体内,一般情况:修复液的量约为800 mL/1架。
    3.阻断内源性过氧化物酶:用吸水纸擦干玻片,免疫组化笔在组织周围画圈,滴加50 μL内源性过氧化物酶阻断剂(试剂C到切片组织上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育30 min,用PBS缓冲液冲洗切片5 min,重复三次。
    4.血清封闭:用吸水纸擦干玻片,滴加50 μL正常山羊血清工作液(试剂E),37℃封闭20 min,以减少非特异性染色。
    5.一抗孵育:用抗体稀释液(试剂 D)将一抗原液稀释成工作液,用吸水纸擦干玻片组织周围的液体,滴加适量抗体工作液,置于孵育4℃孵育过夜或37℃孵育1h-2h
    6.复温:4℃过夜后从冰箱拿出样本,在室温下孵育15 min复温(抗体孵育为4℃过夜选用此步骤,如室温孵育直接进入下一步清洗)。用PBS缓冲液冲洗切片5 min,重复三次。
    7.二抗孵育:吸水纸擦干切片后滴加50 μL生物素标记的羊抗兔IgG(试剂F37℃孵育20 min,用PBS缓冲液冲洗切片5 min,重复三次。
    8.三抗孵育:吸水纸擦干切片后滴加50 μL 辣根酶标记的链酶卵白素孵育(试剂G37℃孵育20 min,用PBS缓冲液冲洗切片5 min,重复三次。
    9.显色:甩去 PBS 缓冲液,吸水纸擦干切片;每张切片滴加新鲜配制的DAB工作液50 μL(试剂H:试剂I:试剂A=1:1:18比例配置),孵育3-5 min,光学显微镜下观察染色结果,切勿显色过深;显色后用自来水冲洗切片终止显色。
    【注】:1. DAB显色液需现配现用,避光放置,且在30 min内使用。
    2.可根据需要一次染多张切片,各种试剂量按照上述比例放大即可。
    10.复染:滴加适量苏木素染液(试剂J)复染,孵育1-5 min,自来水冲洗5 min,滴加盐酸酒精分化液分化30 sec,自来水冲洗。
    11.脱水封片:将玻片依次置于70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇,各浸泡 5 min,再将玻片放入二甲苯
    中浸泡15 min,重复三次。玻片取出来稍晾干,用中性树胶封片。
    12.结果判定:
    在光学显微镜下对染色的切片观察并判断。苏木素染细胞核为蓝色,DAB显色的阳性表达为棕黄色。
    HB221025
     

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    • 作者
    • 内容
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    图标文献和实验
    该产品被引用文献
    [1] Li M, Li SC, Dou BK, et al. Cycloastragenol upregulates SIRT1 expression, attenuates apoptosis and suppresses neuroinflammation after brain ischemia. Acta Pharmacol Sin. 2020;41(8):1025-1032. doi:10.1038/s41401-020-0386-6(IF:5.064)
    相关实验
    • IHC常见问题分析及处理

    • IHC原理、操作及注意事项

      免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的一项技术。 IHC 的实验流程和方法总体不难,但做出漂亮的染色结果却不容易,所谓“细节决定成败”,也正是IHC 实验中尤为重要的关键点。那么“细节”主要是哪一些呢?下面就为您一一道来。(以石蜡组织切片为例介绍) 标本固定 固定的目的除了使细胞内的蛋白质凝固,减少

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