用于常规细胞膜标记的PKH26红色荧光细胞连接子试剂盒

干货：外泌体研究实操中的常见问题解答

专用间充质干细胞培养基，细胞培养24小时后，再替换为完全的外排体专用间充质干细胞的进行。 20、关于外泌体红色荧光标记染料（PKH26 / PKH67 ）相关实验事项注意事项 a、建议用于染料标记的外泌体原始浓度达到0.5~1μg/μL。外泌体浓度过低实验失败风险较高。 b、外泌体染色步骤中去除游离染料的第4、5步必备，以色列游离染料对更新实验的干扰。这一步即将重新去除外泌体，所有外泌体去除封闭方式均适用。 c、去除游离染料的方法是按照外泌体提取方法再次提取外泌体，推荐umibio外泌体提取纯化试剂盒

流式细胞仪检测细胞凋亡

的外侧。Annexin-V是一种35-36KD的钙粒子依赖的磷脂结合蛋白，它对PS具有较高的亲和力。细胞凋亡时，可以和外翻的PS结合，从而可以检测凋亡的细胞。发生死亡的细胞其细胞膜上的PS也外翻，因而也会阳性。因此，常用的凋亡试剂盒除了采用Annexin-V标记之外，还会加一种DNA染料，常用的有PI和7-AAD，由于死亡的细胞膜通透性增高，染料可以进入细胞内和DNA结合，从而可以发荧光，区分出死细胞。下图给出的是在使用FAS单抗诱导前后的检测结果，横坐标是Annexin-V FITC，纵坐标是PI

PKH 不适合染外泌体？看看文献怎么说

性   未除尽的PKH会弥散进入细胞，同时标记细胞膜，引起观测的假阳性（Fig.2）。PKH染色下，本应仅可见外泌体的荧光探针同样表现出了细胞膜轮廓； Fig.2 EvLINK和PKH标记外泌体的荧光共聚焦拍照   3. 二次标记造成的假阳性   由于外泌体膜与细胞膜结构的相似性，常规染料标记的外泌体在被细胞摄取后一旦脱落，会二次标记细胞膜带来非外泌体荧光信号；   4. 非外泌体标记造成的假阳性   PKH作为一款亲脂性染料，并不具备膜特异性，外泌体中的脂质颗粒状杂质