用于常规细胞膜标记的PKH26红色荧光细胞连接子试剂盒

干货：外泌体研究实操中的常见问题解答

% 以上时收集细胞上清液。 解决方案 2：采用的是培养基逐步替换的方法。逐步减少原干细胞培养基的用量和逐步增加外泌体专用间充质干细胞培养基的用量，在干细胞融合度 20% 时，吸取一半的原始培养基，加入一半的外泌体专用间充质干细胞培养基，细胞培养 24 小时后，再替换为完全的外泌体专用间充质干细胞培养基的进行培养。 20、关于外泌体红色荧光标记染料（PKH26/PKH67）相关实验注意事项 a、建议用于染料标记的外泌体原始浓度达到 0.5~1μg/μL。外泌体浓度过低实验失败风险较高。 b、外泌

流式细胞仪检测细胞凋亡

的外侧。Annexin-V是一种35-36KD的钙粒子依赖的磷脂结合蛋白，它对PS具有较高的亲和力。细胞凋亡时，可以和外翻的PS结合，从而可以检测凋亡的细胞。发生死亡的细胞其细胞膜上的PS也外翻，因而也会阳性。因此，常用的凋亡试剂盒除了采用Annexin-V标记之外，还会加一种DNA染料，常用的有PI和7-AAD，由于死亡的细胞膜通透性增高，染料可以进入细胞内和DNA结合，从而可以发荧光，区分出死细胞。下图给出的是在使用FAS单抗诱导前后的检测结果，横坐标是Annexin-V FITC，纵坐标是PI

PKH 不适合染外泌体？看看文献怎么说

性   未除尽的PKH会弥散进入细胞，同时标记细胞膜，引起观测的假阳性（Fig.2）。PKH染色下，本应仅可见外泌体的荧光探针同样表现出了细胞膜轮廓； Fig.2 EvLINK和PKH标记外泌体的荧光共聚焦拍照   3. 二次标记造成的假阳性   由于外泌体膜与细胞膜结构的相似性，常规染料标记的外泌体在被细胞摄取后一旦脱落，会二次标记细胞膜带来非外泌体荧光信号；   4. 非外泌体标记造成的假阳性   PKH作为一款亲脂性染料，并不具备膜特异性，外泌体中的脂质颗粒状杂质