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上海益启生物科技有限公司
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1KT
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文献和实验・ Standard (alkaline lysis) Mini-Prep (Goldberg Lab) Standard protocol for mini-prep and recipe for solution I, II and III. Alkaline Lysis Minipreps of Plasmid or Cosmid DNA (Donis Keller Lab) Plasmid or cosmid
,如HB101 )中小量制粒DNA时,建议舍弃煮沸法。因为煮沸步骤不能完全灭活内切核酸酶A,以后在Mg2+存在下温育(V中用限制酶时)质粒DNA可被降解。 在上述方案的步骤9)之间增加一步,即用酚:氯仿进行抽提,可以避免这一问题。 ii.此法制备的高考贝数质粒(如Xf3哉pUC),其产量一般约为:每毫升原细菌增减物3-5μg。 iii.如果要通过限酶切割反应来分析DNA,可取1μlDNA溶液加到另一个含8μl水的微量离心管内,加1μl 10x限制酶缓冲液和1单位所需限制酶,在适宜温度温育1-2小时
1. Grow a fresh overnight culture of lambda host cells (we use K803 for EMBL3) in LB or T-broth fortified with 10mM Mg++ . 2. Mix a small amount (1 to 20μl, aim for an M.O.I. of +0.01) of high titer phage lysate (e.g. from a plate lysate
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