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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海益启生物科技有限公司
- 规格:
10 X 5 ML
一般描述
FastStart™ Universal SYBR® Green预混液(Rox)是一种用于qPCR和RT-qPCR的即用型热启动反应混合物,适用于所有需要用ROX标准化的实时荧光定量PCR系统。SYBR® Green I是一种DNA双链特异性染料。在DNA合成的每个阶段,包含在反应液中的SYBR® Green I染料可与扩增的PCR产物相结合。扩增子可通过荧光检出。
热启动实验方案经证可大幅提升特异性、灵敏度及PCR得率。在FastStart™ Taq DNA聚合酶的某些氨基酸残基上的热不稳定性封闭基团使得修改后的酶在室温(+15至+25°C)没有活性。因此,在引物可以非特异性结合的阶段并没有发生延伸。FastStart™ Taq DNA聚合酶可在高温(如在+95°C的预孵育步骤)下通过将封闭基团去除而被激活。
应用
FastStart™ Universal SYBR® Green预混液(Rox)可用于任何DNA或cDNA靶标(包括高GC或AT含量靶标)的扩增和检测。将预混液与Transcriptor First Strand cDNA合成试剂盒(Roche)结合以在两步法qRT-PCR中实现好的结果。
FastStart™ Universal SYBR® Green预混液(Rox)已用于qRT-PCR[1][2][3][4][5]和RT-PCR。[6][7][8][9]
特点和优势
- 改善PCR灵敏和特异性。
- 避免对qPCR结果的过度预计。
- 对一系列的DNA或cDNA靶标进行扩增和检测。
- 在qPCR制备中节省时间和工作。
- 防止来自残留污染的假阳性结果。
组分
2x浓度的FastStart Universal SYBR Green Master (Rox)预混液含有FastStart Taq DNA聚合酶、反应缓冲液、核苷酸(dATP, dCTP, dGTP, dUTP)、SYBR Green I以及参考染料。质量
功能测试:每个批次都采用三种类型模板对在qPCR中的性能进行测试:高GC模板、高AT模板及长片段模板(约440 bp)。其他说明
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文献和实验SYBR Green Quantitative PCR Protocol
12μl of master mix for each well, plus some excess1 Rxn: 10μl SYBR Green Mix 52 Rxn: 520μl SYBR 0.4μl Forward Primer (10μM stock) 20.8μl F
%,避免引物内含有互补序列,3』端尽量不要出现含有连续三个以上的 G 或 C 的片段,真核基因设计引物时最好跨内含子哦。 选择合适 ROX 参照染料 各位同学在选购产品、做实验时,首先要弄清自己实验室的仪器对应哪种 ROX(High 还是 Low)!试剂买回来,样也加好了,最后发现不能用在自家仪器上,内心也一定是很崩溃。诺唯赞的染料法荧光定量专用预混液提供各种 ROX 供选择,如果不想这么麻烦,ChamQTM Universal SYBR® qPCR Master Mix (Q711)那是极好
the dye to use as the passive reference,也就是设置我们反应体系是否含有参比荧光。这里需要根据实际情况进行选择,不正确的定义参比荧光同样会导致最终结果的异常。例如图 7 中实验采用染料法进行相对定量分析,但是结果中的扩增曲线异常(图 7A),排查多组分图时发现 SYBR 在扩增循环过程中荧光信号变化正常,但是细致来看作为参比荧光的 ROX 信号却在整个反应过程中信号接近于零(图 7B)。我们知道扩增图谱纵坐标 ΔRn 的数值是报告基团荧光信号和参比荧光信号的比值
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