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上海益启生物科技有限公司
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25G
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文献和实验称量后用蒸馏水溶解,浓 HCl 调 pH 值至 7.4,先配置 10% 脱氧胆酸钠,加入 5 mL 即为0.5%,,再加入1 mL 的 NP-40,混匀后定容至 100 mL,分装,-20℃ 保存。
浓度0.5mol/L NaCl及脱氧胆酸钠进行抽提基膜中的LN等,用高盐(1.7mol/L NaCl)除去其中的杂质胶原。最后通过Sephacryl S-300分子筛层析柱,便可制得纯化的LN。 操作方法: 1.取裸鼠体内传代的EHS瘤10g,剪碎并匀浆。 2.用(Tris-HCl pH7.6,1%脱氧胆酸钠,0.5%PMSF,0.5%细球菌 核酸酶 )溶液,4℃搅拌抽提20min。 3.1,000g×10min,4℃,离心
to another tube and stored in aliquost...... (2)细胞溶于RIPA缓冲液(1×PBS,体积分数为1%NP-40,5g/L脱氧胆酸钠,1g/LSDS,1mmol/LPMSF,10μg/ml抑肽酶,10μg/ml抑酶醛肽)20分钟(0℃),离心上清获蛋白。Bio Rad试剂盒进行蛋白质定量。 (3)培养皿中加入1ml预冷的RIPA裂解缓冲液(Tris-HCl 50mmol/L pH8.0;NaCl 150mmol/L;DTT 1mmol/L;EDTA 0.5mmol/L;NP
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