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斑马鱼技术平台-广东省实验动物
广东省实验动物监测所
斑马鱼技术服务
广东省实验动物监测所斑马鱼技术平台依托广东省国家创新药物孵化基地(新药创制与研发服务-实验动物公共服务大平台)建设,专业从事疾病模型构建、药物高通量筛选评价、活性物质功效评价及作用机理研究,建立以CRISPR/Cas9基因敲除技术和Tol2转基因技术为基础的斑马鱼基因编辑技术,可根据需求开展目的基因定点敲除和敲入服务。同时利用遗传工程手段及诱导方法构建高尿酸血症、高血脂、抑制血管生成、发育毒性、神经行为、睡眠行为等多种模型,可开展药物高通量、低成本个体水平筛选,尤其适用于新化合物的批量筛选,现已开展多种药物筛选评价工作。一、核心服务项目1. 斑马鱼遗传工程资源净化、保藏和供给常年供应各种规格斑马鱼活体资源,并提供遗传工程资源净化、代繁和保种。斑马鱼繁育设施符合国家标准《实验动物 实验鱼质量控制》要求,可保证质量稳定可靠。2. 斑马鱼疾病模型构建目前平台已建立高尿酸血症、高血脂、抑制血管生成、发育毒性、神经行为、睡眠等模型,拥有心脏、血管、中性粒细胞等特异标记转基因斑马鱼,如Tg(fli:EGFP),Tg(cmlc2:EGFP),Tg(lyz:DsRed2)和透明突变系(mitfaw2/w2, roya9/a9)等,并应用于药物筛选评价。(1)转基因模型构建服务 实验室已建立高效Tol2转座系统转基因斑马鱼构建体系,可根据要求定制不同器官特异性表达绿色(EGFP)或红色(mCherry)荧光蛋白的转基因模型。(2)基因敲除模型构建服务实验室建立以CRISPR/Cas9为基础的斑马鱼全基因组基因定向敲除技术,可根据客户需求开展目的基因定点敲除服务。(3) 基因敲低(knockdown)服务 利用RNAi或Morpholino或CRISPRi技术对斑马鱼特定基因进行敲降(Knockdown)。(4) 诱导模型构建 利用化学、物理等手段,通过摄入食品、药品或添加物理干扰等手段,建立人类常见重大疾病斑马鱼模型。3. 药物高通量筛选评价服务3.1 斑马鱼行为学模型在小分子化合物高通量筛选中应用 利用Viewpoint行为学跟踪系统对斑马鱼仔鱼在不同类型小分子化合物中行为学表现进行全自动跟踪,建立每种化合物特征指纹图谱。3.2 斑马鱼Tg (flk1: eGFP/gata1: DsRed)转基因模型在心血管药物筛选中应用 利用血管和血细胞双标记的转基因斑马鱼,采用共聚焦显微镜对斑马鱼进行三维成像,评价药物对血管及血细胞的影响。3.3 睡眠模型及其在中药药效和毒性筛选中的应用 利用化学诱导方法,构建斑马鱼睡眠模型,利用viewpoint评价不同中药复方对斑马鱼睡眠改善作用。3.4 斑马鱼高血脂模型在降血脂药物评价中的应用利用食物诱导法构建斑马鱼高血脂模型,并应用降血脂药物药效筛选评价。3.5 斑马鱼高尿酸模型及其在降尿酸药物有效性评价中的应用 利用药物诱导法构建斑马鱼高尿酸血症模型,应用于降尿酸药物药效评价。3.6 斑马鱼血管抑制模型及其在抗肿瘤药物有效性筛选中应用利用药物诱导法构建斑马鱼血管抑制模型,应用于肿瘤抑制药物有效性筛选评价。3.7 侧线毛细胞损伤模型及其在耳听觉毒性药物筛选中的应用利用化学诱导法构建侧线毛细胞损伤模型,应用于耳听觉毒性药物筛选评价。
4 化妆品功效测试
可开展功效备案测试。
二、仪器设备1. 徕卡共聚焦显微镜;2. 尼康(Nikon)荧光正置/倒置成像显微镜;3. 显微注射系统;4. 法国Viewpoint自动化斑马鱼行为/心率/血流/三维运动轨迹分析系统;5. ABI7500荧光定量仪;6. 伯乐(BioRad)全套电泳/转模/成像等Western blot设备;7. Thermo二氧化碳(CO2)培养箱、生物安全柜、高速冷冻离心机等细胞培养设备;8. 莱卡(Leica)全套脱水/包埋/切片/摊片设备;9. 超高速离心机等。
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