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- YBio/钰博生物
- YB-729930y-15
- 中国
- 2025年07月16日
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- 详细信息
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- 技术资料
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大量
- 英文名：
Helicobacter pylori Probe qPCR Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
50次
Helicobacter pylori Probe qPCR Kit
幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的细菌，也是目前所知能够在人胃中生存的唯一微生物种类，该细菌会引起幽门螺杆菌病，包括由幽门螺杆菌感染引起的胃炎、消化道溃疡、淋巴增生性胃淋巴瘤等。慢性胃炎和消化道溃疡患者的普遍症状为：食后上腹部饱胀、不适或疼痛，常伴有其他不良症状，如嗳气、腹胀、反酸和食欲减退等。有些患者还可出现反复发作性剧烈腹痛、上消化道少量出血等。据此，专家们认为，及早发现幽门螺杆菌感染者，及时而有效地用抗菌素杀灭幽门螺杆菌，对预防和控制胃癌有重大意义，因此快速检测幽门螺旋杆菌具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术，本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测幽门螺旋杆菌的试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化，灵敏性高。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据人幽门螺旋杆菌高度保守的VP1区设计，不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
6.本产品只能用于科研。
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 2×Probe qPCR Magic Mix | 500μL（本色盖） |
| 试剂二 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL（黄盖） |
| 试剂三 | 幽门螺旋杆菌探针法qPCR引物混合液 | 100μL（白盖） |
| 试剂四 | 幽门螺旋杆菌qPCR探针 | 50μL（棕色管） |
| 试剂五 | 幽门螺旋杆菌qPCR阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50μL（黄盖） |
| 试剂六 | 天净沙DNA释放剂试用装 | 50次（试用装） |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输、-20℃保存，有效期12个月。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、稀释标准曲线样品
（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。
三、Probe qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
| 成分 | 样品管 N+2 个 | PCR 阴性对照管 | 标准曲线样品管（2-7 管） |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 幽门螺旋杆菌qPCR 探针 | 1μL | 1μL | 各 1μL |
| 幽门螺旋杆菌探针法qPCR引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| N+2 个待测 DNA 模板 | 7 μL | 不加 | 不加 |
| 超纯水 | 不加 | 7 μL | 不加 |
| 第 7 步所得标准曲线样品稀释液（2-7 号） | 不加 | 不加 | 各7μL（2号样到2号管，3 号样到3号管…） |
11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min |
PCR 反应 （40 个循环） |
94℃ | 0.5 min |
| 50℃ |
0.5 min（采集 FAM 通道的荧 光信号） |
|
| 72℃ | 0.5 min | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10min |
四、数据处理
12.以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
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文献和实验做 real-time PCR之前，你应该如何着手设计引物？做哪些准备？看完必会！
过，你要先确定你选择哪个方法。如果你想用 Taqman Probe 法，请你选择 primer express 3.0。如果你想用 SYBR 法，我建议你选 primer premier 5.0。 为什么？请往下看。 3）两种引物设计软件之比较。 先说专门为 real-time PCR 定制的 primer express 3.0 。这个软件其实是为 Taqman 探针法设计的，而不适合SYBR染料法。 如果你用探针法，强烈推荐。打开软件就会发现，在方法选择的下拉菜单中
miRNA实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR从1996年美国Applied Biosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个
实时荧光定量PCR从1996年美国AppliedBiosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个PCR过程。（2）SYBR荧光染料法：该方法
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