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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
室温
- 保质期:
12个月
- 供应商:
上海研生
- 规格:
100ml
注意事项:
1、本产品经0.22μm过滤除菌,使用时应注意无菌操作,避免污染;
2、本产品为浓缩液,请根据需要稀释后使用;
3、2℃~8℃中解冻,混匀后使用,切忌反复冻融,用量较少时建议分装冻存;
4、2℃~8℃中保存12个月内有效;
5、本产品仅用于科研或进一步研究使用,不用于诊断和治疗。
注意事项:
a.尽量减少反复冻融的次数,以免失效。 b.基因转染到细胞内要一段时间才能表达出蛋白质, 所以筛选不能太早。
c. 筛选也不宜太迟,一般要在转染24h之后才开始加G418筛选。因为转染了外源基因 的细胞代谢负荷较大,增值较慢,时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没,最终导致筛选不出阳性克隆。
4. 随着细胞代谢,G418的浓度和活性都会下降,应每3~5天更换一次含有G418的筛选液,这时药物浓度可以降至200μg/ml。
5.加药筛选约5~7天左右,细胞会大量死亡,为了减少死亡细胞对阳性克隆的不利影响以及增加阳性克隆的得到率,可以应用套环法或刮除法结合有限稀释法来筛选阳性克隆。加药后,在高倍镜下,刮除阴性克隆,消化阳性克隆后继续筛选培养。或者用套环套住阳性克隆,在套环内加胰蛋白酶或EDTA消化,把消化液吸到另外一个新的孔中培养,最后再用有限稀释法把阳性克隆在96孔板中筛选。 6. 一般经过4周左右的筛选,得到的阳性克隆都比较稳定。但是外源基因如果没有整合到基因组中的话,目的基因还是很容易丢失的,再次筛选往往是必不可少的,经过2次以上的筛选之后才能找到遗传稳定的细胞克隆。
7.尽量避免污染。
8.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
免疫学试剂:
PBS(0.01mol/L,pH7.2-7.4)、PBST、抗荧光淬灭封片剂、甘油明胶封固液、中性树胶、柠檬酸钠抗原修复液(50×)、Tris-EDTA抗原修复液、ELISA洗涤液、ELISA包被缓冲液、ELISA封闭液、免疫染色一抗稀释液、荧光抗体稀释液、TMB底物显色试剂盒。 固定液:多聚(4%) 、中性福尔马林固定液(10%)、环保组织固定液(即用型)、Carnoy固定液、Bouin's固定液、等。
脱钙液:甲酸脱钙液、脱钙终点检测试剂盒等。
班氏试剂、斐林试剂、罗斯试剂、Molisch试剂、Seliwanoff试剂、Tollen试剂、Griess试剂、醋酸白试剂、血红蛋白检测试剂盒、活化部分凝血活酶时间(APTT)检测试剂盒、优球蛋白溶解时间(ELT)检测试剂盒、尿蛋白检测试剂盒、尿本-周氏蛋白定性检测试剂盒、粪便隐血定性检测试剂盒、脑脊液总蛋白检测试剂盒、总蛋白检测试剂盒、植物总糖和还原糖检测试剂盒、葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD微板法)、乳酸检测试剂盒、铁(钙、磷)检测试剂盒、尿素/尿酸检测试剂盒、总胆固醇(TC)检测试剂盒、肝素钠检测试剂盒、维生素C检测试剂盒、碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒、淀粉酶(AMS)检测试剂盒、丙二醛(MDA)检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒、总超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒、过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒等。 G418溶液(geneticin,20mg/ml)
人促卵泡素(FSH) human FSH ELISA KIT 96T/48T
人促卵泡刺激素(FSH) human FSH ELISA KIT 96T/48T
人游离β绒毛膜促性腺激素(f-β-HCG) human f-β-HCG ELISA KIT 96T/48T
人β-内啡肽(Beta-Endorphin)ELISA KIT human Beta-Endorphin ELISA KIT 96T/48T
人的牛血清白蛋白残留检测(BSA)ELISA Kit Human BSA ELISA Kit 96T/48T
Western洗涤液人结合珠蛋白(Hpt) Human Haptoglobin ELISA KIT 96T/48T
人α1-酸性糖蛋白(α1-AGP) Human α1-Acid glycoprotein ELISA Kit 96T/48T
人铜蓝蛋白(CP) Human Ceruloplasmin (CP) ELISA Kit 96T/48T
人髓磷脂碱蛋白(MBP) Huamn MBP ELISA Kit 96T/48T
人水通道蛋白5(AQP5) Human Aquaporin5 ELISA Kit 96T/48T
人水通道蛋白4(AQP4)ELISA试剂盒 Human Aquaporin4 ELISA Kit 96T/48T
人水通道蛋白3(AQP3) Human Aquaporin3 ELISA Kit 96T/48T
人水通道蛋白1(AQP1) Human Aquaporin1 ELISA Kit 96T/48T
人水通道蛋白0(AQP0) Human Aquaporin0 ELISA Kit 96T/48T
人水通道蛋白2(AQP2)ELISA试剂盒 Human Aquaporin2 ELISA Kit 96T/48T
人高迁移率族蛋白1(HMGB1) Human high mobility group box-1 protein ELISA Kit 96T/48T
人肌球蛋白(Myosin) Human Myosin ELISA Kit 96T/48T
人结蛋白(Desmin) Human desmin ELISA Kit 96T/48T
人神经肽Y(NPY) Human neuropeptide Y ELISA Kit 96T/48T
人血栓前体蛋白(TpP) Human TpP ELISA Kit 96T/48T
人血红素氧合酶2(HO-2) Human heme oxygenase-2 ELISA Kit 96T/48T
人转铁蛋白受体(TFR)ELISA试剂盒 Human transferrin receptor ELISA Kit 96T/48T
人γ氨基丁酸(GABA) Human Gamma-aminobutyric acid ELISA Kit 96T/48T
人P物质(SP)ELISA试剂盒 Human Substance P ELISA Kit 96T/48T
人血管活性肠肽(VIP) Human Vasoactive Intestinal Peptide (VIP) 96T/48T
人α-L-岩藻糖苷酶(AFU) Human α-L-fucosidasea useful ELISA Kit 96T/48T
人血红素氧合酶1(HO-1)ELISA试剂盒 Human heme oxygenase-1 ELISA Kit 96T/48T
人内皮脂肪酶(EL)ELISA试剂盒 Human Endothelial lipase ELISA Kit 96T/48T
标准溶液的配制:
1.直接配制法 对于纯净的物质(称做基准物质)可准确进行称量,用蒸馏水溶解后,转移到一定容积的容量瓶中稀释至标线,溶液的准确浓度可以直接计算出来。溶质的纯度、性质等对浓度有较大影响,为此,对用来直接配制标准溶液用的基准物质必须具备以下条件: (1)物质的纯度要高,含量不得低于99.9%,杂质的含量应当少到可以忽略的程度。 (2)物质的分子组成应与其化学式完全符合,包括结水合物中的结品水含量也必须与其化学式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。
(3)性质稳定,贮蔵时应不发生变化,不易吸收空气中的水分、二氧化碳等气体而改变其成分,不易风化潮解和被空气氧化,烘干时不易分解等。此外最好使用分子量较大的基准物质以减小称量误差。
2.间接配制法 凡不符合基准物质条件的物质,可先配制成近似所需浓度的溶液,再用基准物质溶液或能与其发生定量反应的标准溶液进行滴定,求其准确浓度,这种通过滴定来确定准确浓度的操作叫做“标定”。间接法配制近似浓度溶液时不需用分析天平称量和容量瓶配制,可用台秤、量筒等器皿。将称好的物质转移到干净的试剂瓶中,先加少量蒸馏水将其溶解,继续用量筒加蒸馏水至需要量即可。由于大多数试剂不符合基准物的条件,故间接法配制标准溶液是经常的。如固体NaOH因易吸收空气中的水分而潮解和吸收CO2使表面变质;浓盐酸因易挥发而无法准确称量;高不易得到分析纯级的试剂等,这些物质的标准溶液须用间接法来配制,经标定后再做标准溶液使用。
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文献和实验样本准备 蛋白提取 所需仪器:匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF(蛋白酶抑制剂)、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子,消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液:PMSF=100:1。 1) 组织处理:首先用酒精棉消毒剪刀和镊子,取适量的组织于匀浆器中,用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。(含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆) 2) 细胞处理: A、 贴壁细胞处理:去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解
llh刘丽华 各位好:我做了1个多月western blot了,内参跑得还可以,但是目的蛋白总是跑不好,今天跑出来非特异性条带很清楚,而目的条带却很淡,不知是什么原因!前一次也是这种情况,我就延长封闭时间至2h,一抗1:700,二抗1:5000,请各位高手帮忙分析一下吧!下面是我的图片,最下面,模糊的一条(靠图片中间的一条)是我的目的条带! coffeeshine 如果非特异带很清楚,延长封闭时间没作用
xylish1 菜鸟一枚,目前要做HER-2(膜蛋白,185KD)western blot ,求教各位,一抗哪个公司的好?使用时抗体浓度,转膜时间及注意事项,多谢! zhe992000 搭车求助,我想验证肿瘤组织中透明质酸(hyaluronan)的表达水平,这是一个糖蛋白,主要在细胞外基质中表达。在文献上一般是通过透明质酸合成酶的水平 或者透明质酸水解酶的水平来间接判断透明质酸的表达水平,我想直接测定透明质酸的表达量,不知
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