- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
4℃
- 保质期:
12个月
- 供应商:
上海研生
- 规格:
5ml
注意事项:
1、本产品经0.22μm过滤除菌,使用时应注意无菌操作,避免污染;
2、本产品为浓缩液,请根据需要稀释后使用;
3、2℃~8℃中解冻,混匀后使用,切忌反复冻融,用量较少时建议分装冻存;
4、2℃~8℃中保存12个月内有效;
5、本产品仅用于科研或进一步研究使用,不用于诊断和治疗。
注意事项:
a.尽量减少反复冻融的次数,以免失效。 b.基因转染到细胞内要一段时间才能表达出蛋白质, 所以筛选不能太早。
c. 筛选也不宜太迟,一般要在转染24h之后才开始加G418筛选。因为转染了外源基因 的细胞代谢负荷较大,增值较慢,时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没,最终导致筛选不出阳性克隆。
4. 随着细胞代谢,G418的浓度和活性都会下降,应每3~5天更换一次含有G418的筛选液,这时药物浓度可以降至200μg/ml。
5.加药筛选约5~7天左右,细胞会大量死亡,为了减少死亡细胞对阳性克隆的不利影响以及增加阳性克隆的得到率,可以应用套环法或刮除法结合有限稀释法来筛选阳性克隆。加药后,在高倍镜下,刮除阴性克隆,消化阳性克隆后继续筛选培养。或者用套环套住阳性克隆,在套环内加胰蛋白酶或EDTA消化,把消化液吸到另外一个新的孔中培养,最后再用有限稀释法把阳性克隆在96孔板中筛选。 6. 一般经过4周左右的筛选,得到的阳性克隆都比较稳定。但是外源基因如果没有整合到基因组中的话,目的基因还是很容易丢失的,再次筛选往往是必不可少的,经过2次以上的筛选之后才能找到遗传稳定的细胞克隆。
7.尽量避免污染。
8.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
免疫学试剂:
PBS(0.01mol/L,pH7.2-7.4)、PBST、抗荧光淬灭封片剂、甘油明胶封固液、中性树胶、柠檬酸钠抗原修复液(50×)、Tris-EDTA抗原修复液、ELISA洗涤液、ELISA包被缓冲液、ELISA封闭液、免疫染色一抗稀释液、荧光抗体稀释液、TMB底物显色试剂盒。 固定液:多聚(4%) 、中性福尔马林固定液(10%)、环保组织固定液(即用型)、Carnoy固定液、Bouin's固定液、等。
脱钙液:甲酸脱钙液、脱钙终点检测试剂盒等。
班氏试剂、斐林试剂、罗斯试剂、Molisch试剂、Seliwanoff试剂、Tollen试剂、Griess试剂、醋酸白试剂、血红蛋白检测试剂盒、活化部分凝血活酶时间(APTT)检测试剂盒、优球蛋白溶解时间(ELT)检测试剂盒、尿蛋白检测试剂盒、尿本-周氏蛋白定性检测试剂盒、粪便隐血定性检测试剂盒、脑脊液总蛋白检测试剂盒、总蛋白检测试剂盒、植物总糖和还原糖检测试剂盒、葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD微板法)、乳酸检测试剂盒、铁(钙、磷)检测试剂盒、尿素/尿酸检测试剂盒、总胆固醇(TC)检测试剂盒、肝素钠检测试剂盒、维生素C检测试剂盒、碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒、淀粉酶(AMS)检测试剂盒、丙二醛(MDA)检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒、总超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒、过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒等。 G418溶液(geneticin,20mg/ml)
标准溶液的配制:
1.直接配制法 对于纯净的物质(称做基准物质)可准确进行称量,用蒸馏水溶解后,转移到一定容积的容量瓶中稀释至标线,溶液的准确浓度可以直接计算出来。溶质的纯度、性质等对浓度有较大影响,为此,对用来直接配制标准溶液用的基准物质必须具备以下条件: (1)物质的纯度要高,含量不得低于99.9%,杂质的含量应当少到可以忽略的程度。 (2)物质的分子组成应与其化学式完全符合,包括结水合物中的结品水含量也必须与其化学式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。
(3)性质稳定,贮蔵时应不发生变化,不易吸收空气中的水分、二氧化碳等气体而改变其成分,不易风化潮解和被空气氧化,烘干时不易分解等。此外最好使用分子量较大的基准物质以减小称量误差。
2.间接配制法 凡不符合基准物质条件的物质,可先配制成近似所需浓度的溶液,再用基准物质溶液或能与其发生定量反应的标准溶液进行滴定,求其准确浓度,这种通过滴定来确定准确浓度的操作叫做“标定”。间接法配制近似浓度溶液时不需用分析天平称量和容量瓶配制,可用台秤、量筒等器皿。将称好的物质转移到干净的试剂瓶中,先加少量蒸馏水将其溶解,继续用量筒加蒸馏水至需要量即可。由于大多数试剂不符合基准物的条件,故间接法配制标准溶液是经常的。如固体NaOH因易吸收空气中的水分而潮解和吸收CO2使表面变质;浓盐酸因易挥发而无法准确称量;高不易得到分析纯级的试剂等,这些物质的标准溶液须用间接法来配制,经标定后再做标准溶液使用。
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文献和实验immyself 有那种干了之后会把盖玻片牢牢粘著的吗? 现在用的封片剂是液态的,老是滑来滑去 谢谢! hongfunv1984 我最近也在做细胞免疫荧光,也是发现这个问题。后来发现是防淬灭剂加的太多了,现在在做实验室就没有这种情况了。。你可以稍加一点就行了。用10*10的盖玻片封片。 photomedicine 是的,防淬灭剂不能加太多,否则会滑来滑去,加1-2滴其实就够
剂。如卤素离子、重金属离子、具有氧化性的有机化合物(硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物和羟基化合物)及氧分子等。 2)荧光的抗淬灭:标记样品的荧光淬灭是在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察时遇到的主要问题。由于激光扫描共聚焦显微镜具有更强的功率和聚焦更准确的光束,与普通荧光显微镜相比,标本的光漂白作用更为明显,荧光素的荧光可在连续观察过程中逐渐减弱或消失。因此,应考虑使用抗荧光淬灭剂(抗荧光衰减剂)。常用抗荧光淬灭剂有P-苯二胺(Para-phenylene diamine,PPD)、n-丙基
。 7. 光漂白 减少照明强度/时间。 选用抗荧光淬灭封片剂。 二、背景太高了怎么办? 大家在操作时可以通过设置对照,帮助我们迅速判断背景的来源。对照包括自发荧光对照(无一抗、二抗)和无一抗对照。 1. 封闭不足 选用二抗种属来源的血清封闭。 选用链霉亲和素/生物素系统,需要用链霉亲和素封闭内源的生物链酶。 选用HRP系统,需要使用过氧化氢等商业化试剂盒去活化内源性HRP。 选用AP系统,需要使用左旋咪唑等商业化试剂去活化内源
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