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- 上海研生
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- YS-R987609
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
4℃
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海研生
- 规格：
100ml
用途：又称遗传霉素,新霉素,对细菌、酵母、高等植物、原生生物、哺乳动物细胞具有氨基苷类毒性,对真核细胞进行筛选。
标准溶液配制：
1。先將PH7.00同PH4.00藥粉分別倒入250毫升蒸餾水中，充分溶解，用兩支玻璃瓶密封保存，做 好標簽。
2 。在校正前，準備ORP標準溶液。
3 。86毫伏：取50至100毫升PH7.00標準溶液置入一玻璃杯中，再加入稍許醌氫醌，充分攪拌。
4 。256毫伏：取50至100毫升PH4.00標準溶液置入一玻璃杯中，再加入稍許醌氫醌，充分攪拌。 5。 ORP標準液保存期為72hour。
特点：
1、采用全进口原料：高效、灵敏、特异，严格引进国际技术标准进行批量。
2、先进的优化方案：重复性高，可靠性强，效果稳定。 3、购买本公司的溶液，提供免费代测技术服务的，有技术疑问可以提供一对一的解答，存在质量问题可申请退换。
4、技术服务：专业，及时，耐心。
注意事项：
1.根据实验具体要求操作，以说明书为准。
2.一般植物细胞筛选浓度在20~200μg/ml，动物细胞筛选浓度50~1000μg/ml，应根据具体实验选择最佳筛选浓度。
3.做好预防颠倒，摔坏的措施和管理体制。
4.必须戴好防护用具，小心翼翼进行操作。
5.购买试剂时要想到一次性用完。若估算不足有剩余的话，要更加注意其保管和管理。
6.对于使用后的废弃物，不要或旧的试剂，应按照相关法律法规正当处理。
使用方法：
1. 常用筛选浓度
注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。 一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。
1） 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2） 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。 3） 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4） 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5） 按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。 3. 稳定转染细胞的筛选
1） 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。 注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2） 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。 3） 筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4） 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5） 之后更换正常培养基培养即可。
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文献和实验Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞： 按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
又制成细胞分选器。1969年范迪拉等应用氩离子激光器和分层壳流技术，建立了一台液流、照明光轴和检测器轴互相正交的流式细胞计。以后，经H.R.休利特等改进了的细胞分选计，能使流动液体内的细胞喷射到空气中进行测量。但上述各系统中，所使用的激光光束以及设在收集荧光的检测方向上的限制光栏都比液流中的细胞大，因而不能提供关于细胞形态学方面的信息，故称为零分辨率系统。随后，L.L.惠利斯和S.F.帕滕发展了一种低分辨率的狭缝扫描技术，可以测定细胞核荧光、细胞和细胞核的大小。1969年，W.格德和W.迪特里希描述
%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。 · 测试步骤用间接步骤，将待测细胞悬浮液或细胞培养液接种于指示细胞培养液中（indicator cell，例如Vero cell or 3T6 cell），然后培养指示细胞再作萤光染色。正负反应对照组亦可以接种于indicator cell内作为对照。 · 待测细胞亦可作直接测试，但需为吸附型细胞，培养后直接作萤光染色。有些细胞易有萤光背景，而干扰结果判读，则建议
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