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本Biotin标记辣根过氧化物酶 (Biotin-labeled horseradish peroxidase),也称生物素标记辣根过氧化物酶、生物素标记过氧化物酶、Biotin-labeled HRP、Biotin-HRP、biotinylated peroxidase或辣根过氧化物酶标记生物素,为进口分装,可以用于链霉亲和素(Streptavidin)和亲和素(avidin)或其标记或结合的抗体、核酸、蛋白等的检测。具体用途包括Western、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学、原位杂交、Southern、Northern、EMSA等。
本Biotin-HRP用高纯度的Biotin和超纯的辣根过氧化物酶(RZ>3)通过化学键偶联而成,确保产生极低的本底和极高的灵敏度。本产品中生物素标记辣根过氧化物酶的蛋白浓度为1mg/ml。
生物素(Biotin)又称维生素H、辅酶R,是水溶性维生素,也属于B族维生素,CAS号为58-85-5,分子式为C10H16N2O3S,分子量为244.31。Avidin或Streptavidin是一种4聚体蛋白,可以同时高度特异性地结合4个生物素分子,是一种天然存在生物分子相互作用体系。生物素与Avidin或Streptavidin的结合系统,被称为生物素-亲和素或生物素-链霉亲和素系统,该系统是一种具有高度亲和力、高灵敏度、特异性强和稳定性好等优点的信号放大标记技术,已广泛应用于多种检测系统,如免疫检测、DNA杂交检测、免疫组化、流式细胞术、目标分子的纯化和表征等,有利于信号放大和增加灵敏度。
辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP),可以在Western、EMSA、Southern或Northern等检测时催化发光底物试剂(如ECL、BeyoECL等)产生化学发光,可以在ELISA检测时催化TMB产生蓝色,也可以在免疫组化、免疫细胞化学或Western blot检测时催化DAB产生棕色沉淀。
本Biotin标记辣根过氧化物酶用于各种常规用途的推荐稀释比例参考下表,实际实验操作过程中需根据具体情况适当调节Biotin标记辣根过氧化物酶的稀释比例。对于Western,推荐的稀释范围为1:2000-10,000。
| WB | IHC/IC/ISH | ELISA | Southern/Northern | EMSA |
| 1:2000-10,000 | 1:200-500 | 1:2000-10,000 | 1:2000-5000 | 1:2000-5000 |
WB, Western blot; IHC, Immunohistochemistry; IC, Immunocytochemistry; ISH, in situ hybridization.
本产品如果用于常规的Western检测,以每次检测需10毫升1:5000稀释的本产品计,可以检测100次。
包装清单:| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| A0308 | Biotin标记辣根过氧化物酶 | 0.2ml |
| - | 说明书 | 1份 |
-20℃保存,一年有效。
注意事项:叠·氮·钠会抑制辣根过氧化物酶的活性,在含有辣根过氧化物酶的溶液中不可加入叠·氮·钠。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验【交流】DIG/Biotin标记的Southern/Northern杂交专题讨论
性分析(RFLP)等。 Southern印迹杂交技术包括两个主要过程:一是将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物(硝酸纤维素膜或尼龙膜)上,即印迹(blotting);二是固定于膜上的核酸同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火,即分子杂交过程。该技术是1975年英国爱丁堡大学的E.M.Southern首创的,Southern印迹杂交故因此而得名。 Southern印迹杂交技术是分子生物学领域中最常用的具体方法之一。其基本原理是:具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件
1. 8 mg 辣根过氧化物酶放入1 ml玻璃瓶,加入1 ml双蒸水溶解,液体呈棕色。 2. 放入一个磁力搅拌子,电磁搅拌同时逐滴缓缓加入新配制的 NaIO4 0.2 ml,室温下继续搅拌40 min,液体呈现草绿色。 3. 将全部溶液用滴管装入反复用去离子水冲洗的透析袋中,4 oC 对1 mM pH 4.4的NaAc透析过夜,中间换液3-4次,每次300 ml,溶液最终呈浅棕色。 4.
差异。如以2,2’-联氮-双-[3-乙基苯并噻唑啉]-6-磺酸(ABTS)为氢供体,则只能保护20%的酶活性,而以邻联茴香胺(ODA)为氢供体时,酶活性的保护提高至90%。HRP之所以是迄今为止在ELISA中应用最为广泛的标记用酶,主要是因为其一方面易于提取,价格相对低廉;另一方面性质稳定,耐热及有机溶剂的作用,与抗原或抗体偶联后,活性很少受损失。
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