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100
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上海研生
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50T
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荧光定量PCR原理:
荧光定量PCR最早称TaqMan PCR,后来也叫Real-Time PCR,是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。 一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段, PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和 CT值。
TMEM166 跨膜蛋白166抗体 0.2ml
TOP1mt 线粒体DNA拓普西异构酶Ⅰ抗体 0.1ml
TOP2 alpha DNA拓普西异构酶ⅡA抗体 0.1ml
TOPO II/TOPO II Alpha DNA拓普西异构酶Ⅱ抗体 0.1ml
phospho-TOPO II Alpha (Ser1106) 磷酸化DNA拓普西异构酶Ⅱ抗体 0.1ml
TPH/Trptophan Hydroxylase 色氨酸羟化酶抗体 0.2ml
phospho-TPH(Ser260) 磷酸化色氨酸羟化酶抗体 0.1ml
phospho-TPH(Ser19) 磷酸化色氨酸羟化酶抗体 0.1ml
TPO 甲状腺过氧化物酶抗体 0.2ml
TRA16 睾丸激素受体相关蛋白16抗体 0.1ml
TRA16 睾丸激素孤儿受体相关蛋白抗体 0.1ml
TRADD 肿瘤坏死因子受体1相关死亡域蛋白抗体 0.1ml
phospho-TRADD(Ser299) 磷酸化肿瘤坏死因子受体1相关死亡域蛋白抗体 0.1ml
phospho-TRADD(Ser269) 磷酸化肿瘤坏死因子受体1相关死亡域蛋白抗体 0.1ml
phospho-TRADD(Ser274) 磷酸化肿瘤坏死因子受体1相关死亡域蛋白抗体 0.1ml
TRAF1 肿瘤坏死因子受体相关因子1抗体 0.2ml
TNFR2/TRAF2/CD120b 肿瘤坏死因子受体相关因子2抗体 0.1ml
TRAF3/CD40bp 肿瘤坏死因子受体相关蛋白3抗体 0.1ml
TRAF4/CART 1 肿瘤坏死因子受体相关蛋白4抗体 0.1ml
TRAF6 肿瘤坏死因子受体相关因子6抗体 0.1ml
TRAIL 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抗体 0.1ml
Transthyretin 转甲状腺素蛋白抗体 0.1ml
霍乱弧菌O1(VC O1)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)Transaldolase 1 转醛醇酶抗体 0.2ml
Triosephosphate isomerase 磷酸丙糖异构酶抗体 0.2ml
TRBF1/TRF1 端粒体复制结合因子1抗体 0.1ml
TREM1 髓系细胞触发受体1抗体 0.2ml
TREM2 髓系细胞触发受体2抗体 0.1ml
TREML1/TLT1 髓系细胞触发受体样转录因子1抗体 0.2ml
TREML2/TLT2 髓系细胞触发受体样转录因子2抗体 0.2ml
Ferritin 铁蛋白抗体 0.2ml
Transferrin 转铁蛋白抗体 0.1ml
Transferrin(1F10) 转铁蛋白单克隆抗体 0.1ml
TRF2 端粒结合蛋白2抗体 0.1ml
Telomerase Binding Protein, P23 端粒酶结合蛋白P23抗体 0.1ml
phospho-p23 (Ser113) 磷酸化端粒酶结合蛋白P23抗体 0.1ml
TRIM32 TRIM32抗体 0.1ml
TrK A/NTRK1 酪氨酸激酶A抗体 0.1ml
Phospho-TrkA (Tyr490)/TrkB (Tyr516) 磷酸化酪氨酸激酶A抗体 0.1ml
特点优势:
1. 特异性:所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对细菌种属及血清型的特异检测,特异性均达到100%。
2. 重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性为100%。
3. 灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。
5. 优势1:序列资源丰富,除TIANDZ公布的序列外,公司还进行了大量菌株的序列破译,从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。 6. 优势2:该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证,凭借公司拥有的丰富的菌种资源,每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证,确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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文献和实验1.分类 (1)血清分型 霍乱弧菌(V.cholerae)有不耐热的H抗原和耐热的O抗原。前者为共同抗原,特异性低,后者具有群特异性和型特异性,是霍乱弧菌分群和分型的基础。根据O抗原的不同,霍乱弧菌现有155个血清群,其中仅O1群和O139群引起霍乱。O139血清群是新出现的型别,与O1群抗血清无交叉反应,但可与O22和O155血清群产生交叉反应,遗传学特征和毒力基因与O1群相似。O2血清群~O138血清群可引起人类的胃肠炎,无明显的季节分布,不引起霍乱
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合,将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失,细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核,搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A.悬浮细胞: 按照实验方案进行凋亡诱导,300 g离心5 min,弃上清,收集细胞,用PBS洗涤细胞一次,轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
Cell-Light TM EdU荧光显微镜检测试剂盒说明书
锐博生物新的EdU荧光标记技术,能够方便、快速、准确的检测研究细胞的增殖、周期、凋亡、活性、分化、迁移及示踪。 详细使用说明请见下面的PDF文档! C10310&C10312 Cell-Light TM EdU荧光显微镜检测试剂盒说明书.pdf 需要订购相关产品请填好下面的合同和信息卡发到:sales-cd@ribobio.com ! EdU&EU 订购信息卡.xls Ribobio 2010年购销合同.doc
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