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上海研生
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50T
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荧光定量PCR原理:
荧光定量PCR最早称TaqMan PCR,后来也叫Real-Time PCR,是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。 一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段, PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和 CT值。
NT5C2 胞浆-5′-核苷酸酶-Ⅱ 0.5mg
BECN1(Beclin1) 一种抑癌基因(多肽) 0.5mg
OGP (Ostegenic Growth Peptide) 成骨生长肽 (骨生长激素肽)(蛋白多肽) 0.5mg
OPN 骨桥蛋白(多肽抗原) 0.5mg
BAFF/CD257(B cell activating factor) TNF家族B细胞激活因子抗原 0.5mg
P53 肿瘤抑制基因(抗原) 0.5mg
PACAP-27/38 腺苷酸环化酶激活肽-27/38(抗原) 0.5mg
PACAP-38 腺苷酸环化酶激活肽-38(抗原) 0.5mg
Bid (BH3 interacting domain death agonist) BH3结构域凋亡诱导蛋白抗原 0.5mg
PACAP(6-38 Peptide) 腺苷酸环化酶激活肽6-38 0.5mg
PACAP/VIP receptor 腺苷酸环化酶激活肽/血管活性肠肽受体(抗原) 0.5mg
PACAP receptor-I 腺苷酸环化酶激活肽受体(抗原) 0.5mg
PADI4 (HL-60 PAD)(Protein-arginine deiminase type IV,PADI 4,PAD I4 ) 关节炎相关基因 0.5mg
PDGF-A 血小板源性生长因子-1(抗原) 0.5mg
PDGF-B 血小板源性生长因子-B(抗原) 0.5mg
PDGF-R-A 血小板源性生长因子受体-A(抗原) 0.5mg
PDGF-R-B 血小板源性生长因子受体-B(抗原) 0.5mg
PMP-22(Peripheral Myelin Protein) 外周髓鞘蛋白-22多肽 0.5mg
PI3K 磷脂酰肌醇激酶(抗原) 0.5mg
BMP4(bone morphogenetic protein 4) 骨形态发生蛋白4(抗原) 0.5mg
PLGF (Placenta growth factor) 小鼠胎盘生长因子(多肽抗原) 0.5mg
PLGF (Placenta growth factor) 胎盘生长因子(多肽抗原) 0.5mg
兔出血症病毒通用型(RHDV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)PLGF (Placenta growth factor fragment)(human) 人胎盘生长因子(多肽抗原) 0.5mg
PP-1 蛋白磷酸酯酶-1(抗原) 0.5mg
BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A) 骨成型蛋白受体1A抗原 0.5mg
PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor) D型-过氧化酶活化增生受体(多肽) 0.5mg
PP-2A (protein phosphatase 2A) 蛋白质磷酸酶-2A(抗原) 0.5mg
BOb-1(B-cell oct-binding protein 1) B细胞特异性转录因子抗原 0.5mg
PP-2B alpha 1 蛋白磷酸酯酶-2B 催化亚单位(抗原) 0.5mg
PR (Progestogerone receptor) 孕激素受体(抗原) 0.5mg
PS-1(NT),Presennillin-1(S182) 早老素蛋白-1(抗原) 0.5mg
PS-1,Presennillin-1(CT) 早老素蛋白-1(S182) 0.5mg
BRCA1(Breast cancer susceptbility gene 1)(mouse rat) 乳腺癌易感基因1抗原(小鼠 大鼠) 0.5mg
BRCA1 乳腺癌易感基因1抗原 0.5mg
PSD-95 突触后密度蛋白95(抗原) 0.5mg
BRCA2(Breast cancer susceptbility gene 2) 乳腺癌易感基因2抗原 0.5mg
PTP-1B (Protein-tyrosine phosphatase, non-receptor ) 蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(抗原) 0.5mg
RAR-Alpha (Retinoic acid -R-Alpha) 维甲酸受体-α 多肽 0.5mg
glycoprotein (E1 glycoprotein) [Rubella virus] 风疹病毒糖蛋白多肽片段 0.5mg
SAP-1 (Synapse associated protein-I) peptide 突触相关蛋白-1(多肽抗原) 0.5mg
SARS S-protein(抗原) 0.5mg
SARS putative orflab polyprotein (SARS coronavirus CUHK-W1)(抗原) 0.5mg
禽流感H5亚型全病毒抗原 H5N1-H5 1mg
BSEP peptide 胆汁酸盐输出泵蛋白抗原 0.5mg
Secretin 分泌素(抗原) 0.5mg
Secretin receptor 分泌素受体(抗原) 0.5mg
特点优势:
1. 特异性:所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对细菌种属及血清型的特异检测,特异性均达到100%。
2. 重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性为100%。
3. 灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。
5. 优势1:序列资源丰富,除TIANDZ公布的序列外,公司还进行了大量菌株的序列破译,从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。 6. 优势2:该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证,凭借公司拥有的丰富的菌种资源,每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证,确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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Nardelli和Amaldi,John及其同事等相继利用同位素标记核酸探针进行了细胞或组织的基因定位。Orth(1970)应用3H标记的兔乳头状瘤病毒cRNA探针与兔乳头状瘤组织的冰冻切片进行杂交,首次用原位杂交技术检出了病毒DNA在细胞中的定位。 由于同位素标记探针具有放射性既污染环境,又对人体有害,且受半衰期限制等特点,因此研究用非放射性的标记物标记核酸探针进行原位杂交,引起了许多学者的重视和探索。Bauman(1981)等首先应用荧光素标记cRNA探针做原位杂交,然后用荧光显微镜观察获得
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