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文献和实验【求助】MDCK转染与免疫荧光问题,解决问题追加丁当,谢谢!
其功能,所以选择用标签染色的方法证实转染效果) 在每次免疫荧光之前我都会看一下GFP的荧光情况,有特异性的荧光表达。 然后我会对转染质粒的细胞进行染色。实验组的一抗我用的是c-myc,对照组1用的一抗为AQP1和c-myc,对照组3一抗用的是AQP1 试验结果:对照组3即阳性对照,能出现阳性结果,说明免疫荧光的操作没有问题。 对照组2,有GFP的荧光,说明至少转染GFP质粒没有问题。 但是,就是没法染出实验
) ,Neo(G418),Zeo,Hygro,其中Puro和BSR是较常用的真核抗性。真核抗性常用于稳定株筛选等过程,具体使用抗性筛选的浓度可通过空细胞抗性预实验确认,浓度梯度可根据抗生素说明书推荐浓度范围设置。(4)蛋白标签:蛋白标签(protein tag):与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。常见标签:3xFLAG,6xHis,HA,Myc ,OLLAS,GST等。需注意目的蛋白是否有功能肽如信号肽,前肽等,蛋白标签需要融合无功能肽的一端
Tag Isolation Kits 实现 2 个小时内从细胞到纯化蛋白的过程,整个过程不需离心、无背景、无材料损失,且兼容自动化高通量的提取流程。基本原理及工作流程如下: μMACS Tag Isolation Kits 支持带有如 HA, His, FLAG (DYKDDDDK), c-myc, GFP, GST 等多种标签肽段表达的目的蛋白纯化。其高灵敏度和无背景的纯化效果,在真核细胞蛋白表达系统的纯化过程中优势明显。 (左)兼容全自动高通量蛋白提取纯化平台 (右)裂解 107 个转导
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