- ￥2490
- YBio/钰博生物
- YB761220-14
- 中国
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Brucella bovis SYBR qPCR Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
50次
Brucella bovis SYBR qPCR Kit
布鲁氏杆菌（Brucella）是一种革兰氏阴性的不运动细菌，牛感染布鲁氏菌
病后的症状有发热，流产，死胎，早产，胎盘滞留，子宫内膜炎，阴道炎，皮炎，
关节炎，关节滑囊炎，食欲不振等。布病的泛滥与畜牧业息息相关。一头奶牛如
果感染布鲁氏杆菌，没有得到及时的清洁和防疫，布病很快会在牲畜群体里暴发，
进而增加人被感染的几率。牧民、从事牧业和乳业一线工作的员工、搞相关研究
的实验人员等经常接触牲畜或布鲁氏杆菌本身的人，被感染的可能性较高。因此
快速检测牛布鲁氏杆菌具有重要意义。本产品就是以染料法荧光定量 PCR 技术
为基础开发的专门检测牛布鲁氏杆菌的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 特异性高，引物是根据牛布鲁氏杆菌高度保守区设计,不会扩增其他细菌。
3. 引物和扩增体系经过优化，灵敏性比常规 PCR 高 100 倍。
4. 提供无传染性的 PCR 阳性对照，便于区分假阴性样品。
5. 一管式操作，荧光 PCR 检测，不容易产生环境污染。
6. 本产品只能用于科研，本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 PCR。
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 2×qPCR MagicMix | 500 μL（棕色管） |
| 试剂二 | 荧光 PCR 专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 试剂三 | 牛布鲁氏杆菌染料法 qPCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 | 牛布鲁氏杆菌染料法 qPCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) | 50 μL（黄盖） |
| 试剂五 | 天净沙核酸释放剂试用装 | 20 次（1mL，绿盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输、-20℃保存，保存期限为 12 个月。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、制备标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，
本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（其浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。本试剂盒免费赠送 20 次免DNA 提取的天净沙核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。
三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果进行定量分析，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线样品。如果做定 性分析，则 6 个标准曲线样品只选一个做（可以选 4 号，其余样品不变）。 以下只介绍定量分析的反应设置。
10. 在标记管中按下表加入各成分：
| 成分 | 样品管 N+2 个 | PCR 阴性 对照管 | PCR阳性对照管（2-7 管） |
| 2×qPCR MagicMix | 10μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 牛布鲁氏杆菌染料法 qPCR引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 自备 10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| N+2 待测样品 cDNA 模板 | 6 μL | - | - |
| 自备超纯水 | - | 6 | - |
| 第 7 步所得 PCR 阳性对照 稀释液（2-7 号） |
- | - | 各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…） |
11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）。
四、荧光定量 PCR 反应参数
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预热 | 50℃ | 2 min |
| 预变性 | 95℃ | 10 min |
PCR 反应 （40个循环） |
95℃ | 15 sec |
| 60℃ |
1 min，（采集 SYBR 通道的荧光信号） |
|
| 按仪器预设程序进行熔解曲线分析 | ||
五、数据处理
12. 设定 60℃-96℃范围的融解曲线分析，排除假阳性。
13. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
14. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。
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文献和实验3245 人抗体阳性：兰州兽研所陷布病危机，中牧实业回应赔偿金额尚未确定！
，可还原硝酸盐，细胞内寄生，可以在很多种家畜体内存活。布氏杆菌属有六种：马耳他布氏杆菌（羊型布氏杆菌）、流产布氏杆菌（牛型布氏杆菌）、猪布氏杆菌和狗布氏杆菌、林鼠布氏杆菌、绵羊布氏杆菌。其中引起人类疾病的有羊、牛、猪和狗布鲁菌。布鲁氏杆菌感染引起的布鲁氏病是一种人畜共患性全身传染病，简称「布病」，又称马耳他热、波浪热。 02.布病的威力布鲁氏病目前已经在《中华人民共和国传染病防治法》把它归类为乙类传染病，与我们更为熟悉的「非典」、「猪流感」、炭疽、艾滋病、狂犬病、乙肝等同属一类传染病。美国疾控
抗原（布鲁氏菌病）和 A抗原（流产），不同种之间其含量具有明显的差异。在培养过程中易发生 S－ R相变异（可能是由于积聚了不能被利用的丙氨酸的作用），致丧失致病力，而凝集反应也完全改变。其寄生在雌体生殖器官或乳腺内，可常常引起流产。该菌还可侵袭血液或网状内皮系统，但症状多不固定。典型种是马耳他热布鲁氏菌（ Brucella melitensis），牛流产布鲁氏菌（ B． abortus）、猪布鲁氏病菌（ B． suis）。这属菌在抗原性等方面表现出与肠道细菌及巴斯德氏杆菌等有亲缘关系。
可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术（分子信标技术，以美国人Tagyi为代表）、 TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）等；荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料，非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ；饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。 嵌合荧光染料法（SYBR GreenⅠ）SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离
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