中华枝睾吸虫PCR试剂盒

产品简介：
中华枝睾吸虫（Clonorchis sinensis）简称华支睾吸虫，又称肝吸虫（liver fluke），华肝蛭。成虫寄生于人体的肝胆管内，可引起华支睾吸虫病 （Clonorchiasis•），又称肝吸虫病。中国超过 1200 万人感染肝吸虫， 由于 肝吸虫感染早期并无明显不适症状，基本上不可能知道感染，肝吸虫寄生在人 体肝脏的胆管内大量繁殖，引起胆汁堵塞、胆管发炎、肝纤维化、肝硬化，还 有资料显示肝吸虫感染与胆管癌、肝癌的发生有密切关系。因此中华枝睾吸虫 的快速诊断具有重要意义。本试剂盒根据 PCR 原理开发，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增中华枝睾吸虫。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。
6. 本产品只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
中华枝睾吸虫PCR 引物混合液	13-30600yw	100 μL（白盖）
中华枝睾吸虫PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	13-30600pc	50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂（试用装）	61202	20 次（1mL、绿盖）
使用手册	13-30600sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL 阳性对照的10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的天净沙核酸释放剂， 本产品的裂解液可以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
中华枝睾吸虫PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
样品制备阴性对照（超纯水）	-	18 μL	-
中华枝睾吸虫PCR的 1000 倍稀释液	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	15 sec
	55℃	15 sec
	72℃	60 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 265bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。