义翘神州 ATG4A表达质粒 C-Flag标签 flag标签质粒

在免疫沉淀IP免疫荧光IF如何正确的选择Flag标签抗体？

在免疫沉淀IP&免疫荧光IF如何正确的选择Flag标签抗体？ Flag标签系统是已被公认的用于表达、纯化以及检测融合蛋白的表达系统，广泛应用于Western blotting、免疫细胞组化、免疫共沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白相互作用、蛋白分离等多个研究领域。Flag标签是一个与重组蛋白相融合的由8个亲水氨基酸（Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）组成的多肽片断。FLAG标签只有8个氨基酸组成，因此它不会占据其他表位与结合域，避免导致融合

质粒测序正常，WB杂不出来，是什么原因？

出来，可能两个原因，第一个是抗体不好，第二个可能是质粒没做好，发生移码了，因为你用的是pEGFP-N2载体，gfp是在n端，就算发生了移码一样可以检测到绿色萤光，仔细检查下你做的质粒看看是否正确。 liuruya 谢谢大家的回复 1.WB应该是没有技术问题，用的是GFP或flag的标签抗体，而且设置了之前做过的基因做阳性对照 2.GFP质粒测序过是完整的且没有移码，flag的是自己构建的也反复check过没有问题 觉得很妖怪 问了当时给我质粒

超亲和性的新型亲和标签系统“PA Tag System”

大阪大学蛋白质研究所藤井勇树、高木淳一东北大学大学院医学系研究科金子美华、加藤幸成 前言在分析蛋白质的功能时最重要的是如何得到高纯度的蛋白。现今提纯蛋白最常用的方法是亲和标签系统。被统称为「Epitope Tag」的肽标签以及其单克隆抗体组成的系统有FLAG、HA、Myc等多种标签。但是，每个标签系统都有优缺点，并不存在完美的标签系统。于是，在克服了众多难关后我们终于开发出有超高亲和性的新型亲和标签系统“PA Tag System”1）。 PA tag的起源Epitope Tag