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- 文献和实验
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大量
- 英文名:
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- CAS号:
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- 保质期:
12个月有效
- 供应商:
普利莱
- 保存条件:
室温
- 规格:
100ml
描述:
SDS-PAGE电泳转膜后为快速检查蛋白是否成功转到膜上或需要将膜上的不同泳道剪切下来,可把膜浸入可逆染色液染色,膜上的蛋白条带将被染成红色,过程完全可逆而且不会影响Western Blot后续操作。用水冲洗或直接将染色的膜放入封闭液即可完全洗去膜上的染色。染色溶液可以回收并反复使用。
适用:
硝酸纤维素膜和PVDF膜的蛋白可逆染色。
储存:
室温保存 12个月有效
操作步骤:
1. 完成蛋白转膜后,将膜完全浸入足量的染色液中,室温孵育2-5分钟,更长的时间并不能明显加深染色。
2.用自来水或蒸馏水快速清洗膜2-3次或用连续水流冲洗,直到膜上红色蛋白条带逐渐显现(期间要仔细进行观察)。继续冲洗,染色将快速消退。
3. 根据蛋白染色条带,检查蛋白是否成功转到膜上。用铅笔或圆珠笔对相应的蛋白位置做标记后,可将膜上的不同泳道安全剪切下来。
4. 染色的膜无须进一步处理,可直接进行Western Blot封闭步骤。此时封闭液可能变红,但不影响后续操作。
说明:
1. 冲洗不足或将导致蛋白条带染色与膜背景的反差小,不易观察;冲洗过度将洗去膜上的染料,使蛋白条带过分退色,此时可加入膜染色液,重新进行染色。
2. 由于染色试剂的可逆性质,膜上的蛋白条带将会退色。膜上轻微染色不影响后续免疫实验。
3. 染色液可以回收并反复使用10次以上,但反复回收将使染液效力降低。
安全性:
无特殊毒性,有刺激性。按一般化学品操作规程处理即可。
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文献和实验要求调整pH 值,控制在要求范围的±0.2之内。应当注意,培养基在高压灭菌后其pH 值降低0.1~0.2,故矫正时应比实际需要p H值高0.1~0.2。 (4)灭菌:根据培养基所含成分及配制数量的不同,选择不同的灭菌方式,既要达到灭菌效果,又不破坏培养基成分。一般对稳定的培养基,如MH琼脂、营养琼脂可用高压灭菌,即121℃15min ;而含糖的培养基则以108℃灭菌为好,以防止糖类破坏。不耐高热的物质如血清、牛乳等,可采用间隙灭菌法灭菌。 (5)分装:根据使用的目的和要求决定分装量。分装
不容易转通。基本都是进口膜!质量应该不差。 P0021A Western转膜液 1L 30.00元 P0022 丽春红染色液 120ml 85.00元 四、抗体孵育 P0023B Western封闭液 100ml 96.00元 (PS:也可以用5%脱脂牛奶代替专用封闭液,光明牌,大约三十一包,超市有卖!如用牛奶配请自行调整浓度一般在3-10%之间) P0023A Western一抗稀释液 100ml 96.00元 一抗 请订购外国公司产品如sant cruse、sigma
%),定容至1,000mL; 2.封闭液:5% 脱脂奶粉,0.02% 叠氮钠,溶于PBST溶液中; 3.丽春红S(Ponceaus)染液:0.5g 丽春红S溶于1mL 冰乙酸中,加水至100mL; 4.PBST洗膜液: PBS 缓冲液含0.5% Tween 20; 5.DAB浓缩显色液(50X):DAB(二氨基联苯胺)是根过氧化物酶的底物之一,临用前稀释。 6.5 x PBS( 磷酸缓冲液 ):在1600mL蒸馏水中溶解82.3g Na 2HPO4 , 20.4g Na
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