猫杯状病毒前病毒PCR试剂盒

产品简介：
猫杯状病毒（Feline calicivirus, FCV）是一种无衣壳的 RNA 病毒，主要 在淋巴结内繁殖复制。主要通过飞沫传播，所谓的飞沫传播指得就是打喷嚏， 喷口水的传播方式。猫杯状病毒感染是猫病毒性呼吸道传染病，主要表现为上 呼吸道症状，即精神沉郁、浆液性和粘液性鼻漏、结膜炎、口腔炎、气管炎、 支气管炎，伴有双相热。猫杯状病毒感染是猫的多发病，发病率高，死亡率低。 因此检测猫杯状病毒具有重要意义。本产品具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 FCV 的 cDNA 模板（需要提前做逆转录）或
含有 FCV 前病毒 DNA 的样品。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增猫杯状病毒前病毒，与其他病毒没
有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（亮黄色）
超纯水	100935	1 mL（蓝色）
猫杯状病毒前病毒PCR 引物混合液	13--54900yw	100 μL（白盖）
猫杯状病毒前病毒PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	13--54900pc	50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂）	61202	20 次（1mL、绿盖）
使用手册	13--54900sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 如果是提取的 FCV 的 RNA，则先逆转录得到 cDNA。本试剂盒不提供相 关试剂。
2. 如果是要提取前病毒 DNA，则用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试 剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。
3. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在 200μL 水中加 10μL 猫 杯状病毒前病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液而得，样品制备阴性对 照是直接用 200μL 水。提取结束后最后得到 200μL 模板 DNA（每个样品） 放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否则 PCR 抑制物很 可能会抑制 PCR。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
猫杯状病毒前病毒PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（猫杯状病毒前病毒PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30sec
	55℃	30sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 920bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。