韦塞尔斯布朗病毒PCR试剂盒

韦塞尔斯布朗病毒PCR试剂盒
Wesselsbron Virus
产品简介：
韦塞尔斯布朗病毒（Wesselsbron Virus、SV）引起韦塞尔斯布朗病 （Wesselsbron disease、WSL），它是一种经蚊虫传播的虫媒人畜共患传染 病毒，主要感染羊和其他一些反刍动物，可引起绵羊和山羊的流产及羔羊死亡， 也会感染人。随着我国与非洲国家交往的不断加强，国际贸易范围不断扩大， 韦塞尔斯布朗病传入我国的风险不断加大，我国已明确将其列八从非洲进口反 刍动物议定书的检疫要求中，掌握该病的流行状况、开展相应的诊断检测技术 研究以及制订相关技术标准不仅十分必要而且迫在眉睫。本产品就是为此目的 根据 PCR 原理开发的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增韦塞尔斯布朗病毒，与其他病毒没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
韦塞尔斯布朗病毒PCR 引物混合液	13-66500yw	100 μL（白盖）
韦塞尔斯布朗病毒PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	13-66500pc	50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂（试用装）	61202	20 次（1mL、绿盖）
使用手册	13-66500sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次天净沙核酸释放剂试用装，其 使用手册可以从本公司网站天净沙核酸释放剂或产品编号 61202 下载。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要 求的样品起始量）中加 10μL 韦塞尔斯布朗病毒 PCR 阳性对照的 1 万倍 稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
韦塞尔斯布朗病毒PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（韦塞尔斯布朗病毒PCR 阳性对照的 10000倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	15 sec
	55℃	15 sec
	72℃	60 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 136bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。