巨细胞病毒PCR试剂盒

产品简介：
巨细胞病毒（Cytomegalovirus，CMV）是一种疱疹病毒组 DNA 病毒。 亦称细胞包涵体病毒，由于感染的细胞肿大，并具有巨大的核内包涵体。巨细 胞病毒分布广泛，其他动物皆可遭受感染，引起以生殖泌尿系统，中枢神经系 统和肝脏疾患为主的各系统感染，从轻微无症状感染直到严重缺陷或死亡。因 此对 CMV 的诊断快速诊断具有重要的意义。本产品就是根据 CMV 保守区设 计引物而开发的高灵敏 PCR 产品。本试剂盒具有下列特点它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增 CMV，不跟其他病毒发生交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。


规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
巨细胞病毒PCR 引物混合液	13--22800yw	100 μL（白盖）
巨细胞病毒PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	13--22800pc	50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂（试用装）	61202	20 次（1mL、绿盖）
使用手册	13--22800sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。本试剂盒免费赠送 20 次天净沙核酸释放剂，其使用手册可以从 本公司网站 www.tiandz.com，通过搜索产品名称一管式病毒 DNAout 或产品编号 61202 下载。
2. 如果要制备 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳 性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在 200μL 水中加 10μL CMV PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液作为阳性对照，样品制备阴 性对照是直接用 200μL 水。提取结束后最后得到 200μL 模板 DNA（每个 样品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否则 PCR 抑 制物很可能会抑制 PCR。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
巨细胞病毒PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（巨细胞病毒PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	93℃	2 min
PCR-1 反应 （10 个循环）	93℃	45 sec
	55℃	60 sec
PCR 反应 （30 个循环）	95℃	30sec
	45℃	60 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。2%琼脂糖电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。 预期的 PCR 产物长度为 86bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必 须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍 后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。