巴斯德氏杆菌属通用PCR试剂盒

产品简介：
巴斯德杆菌属（Pasteuria spp.）为一类具有分支和隔膜菌丝的产芽孢细 菌，属内各种之间在菌体形态、孢子的形状与大小、芽孢附属物的存在以及芽 孢的形状和大小等细菌特征上表现出不均一性。巴斯德杆菌不仅分布广泛，已 在五大洲及大西洋、太平洋及印度洋的岛屿上发现，而且其寄生的线虫种类繁 多，至今已在自由生活线虫、捕食性线虫、植物寄生线虫和昆虫病原线虫四大 类群的 116 个属 323 个种的线虫体内发现这类细菌。本产品就是为此目的根 据 PCR 原理开发的试剂盒，它具有下列特点：
1.  即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增巴斯德氏杆菌属，与其他微生物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
巴斯德氏杆菌属通用PCR 引物混合液	13-50200yw	100 μL（白盖）
巴斯德氏杆菌属通用PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	60908-50200pc	50 μL（黄盖）
使用手册	13-50200sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。可以选用本公司的柱式细菌 DNAout，其使用手册可以从本 公司网站搜索产品名称或产品编号 60802-50 下载。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是巴斯德氏杆菌属通用 PCR 阳 性对照的 100 倍稀释液，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后 得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
巴斯德氏杆菌属通用PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（巴斯德氏杆菌属通用PCR 阳性对照的 100倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30sec
	58℃	30sec
	72℃	15 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期 PCR 产物阳性对照必须有 195bp 条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。