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- 2025年07月16日
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低温冷藏
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详见说明书
- 英文名：
详见说明书
- 库存：
100
- 供应商：
上海一研
- 规格：
50T
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。
样品cDNA合成:
①反应体系
序号 反应物 剂量 1 逆转录buffer 2μl
2 上游引物 0.2μl
3 下游引物 0.2μl
4 dNTP 0.1μl
5 逆转录酶MMLV 0.5μl
6 DEPC水 5μl
7 RNA模版 2μl
8 总体积 10μl
透明质酸氨基葡糖苷酶3(HYAL3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Hyaluronoglucosaminidase 3 (HYAL3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
透明质酸氨基葡糖苷酶2(HYAL2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Hyaluronoglucosaminidase 2 (HYAL2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
2-氨基双加氧酶(ADO)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for 2-Aminoethanethiol Dioxygenase (ADO) 48T/96T Homo sapiens (Human)
细胞附着蛋白3(CYTH3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Cytohesin 3 (CYTH3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸激酶1(STYK1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Serine/Threonine/Tyrosine Kinase 1 (STYK1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
Prominin 2蛋白(PROM2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Prominin 2 (PROM2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
唾液酸酶4(SIAL4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Sialidase 4 (SIAL4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
Atlastin 3蛋白(ATL3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Atlastin 3 (ATL3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
Atlastin 2蛋白(ATL2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Atlastin 2 (ATL2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
Atlastin 1蛋白(ATL1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Atlastin 1 (ATL1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
嵌合蛋白1(CHN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Chimerin 1 (CHN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
血小板亲和蛋白3(PKP3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Plakophilin 3 (PKP3) 48T/96T Homo sapiens (Human)
血小板亲和蛋白4(PKP4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Plakophilin 4 (PKP4) 48T/96T Homo sapiens (Human)
转基因构建PAT基因-35S终止子染料法qPCR试剂盒丙氨酸/丝氨酸/半胱氨酸/苏氨酸转运蛋白(ASCT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Alanine/Serine/Cysteine/Threonine Transporter (ASCT1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
葡萄糖转运蛋白12(GLUT12)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Glucose Transporter 12 (GLUT12) 48T/96T Homo sapiens (Human)
葡萄糖转运蛋白10(GLUT10)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Glucose Transporter 10 (GLUT10) 48T/96T Homo sapiens (Human)
葡萄糖转运蛋白11(GLUT11)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Glucose Transporter 11 (GLUT11) 48T/96T Homo sapiens (Human)
葡萄糖转运蛋白7(GLUT7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Glucose 轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。
实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
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文献和实验源序列，这些序列通常不存在于野生型植物中。其中，这两个外源的DNA序列与花椰菜花叶病毒的35S启动子和根癌农杆菌的NOS终止子整合在一起。假如这两个序列的任一个被扩增出来，则表明外源基因已经转化入植物基因组中。原则上所有已批准的转基因农作物都是用含有这两个元件或其中任一个的构建载体转化的。对于一些在转基因构建载体中新使用的启动子和终止子序列的检测，逐渐成为科学家们关注的焦点。目前，已经设计了一些针对不同大小产物的引物对。表1为合成的引物序列，选择退火位点生成单一DNA片段，以便于结果的分析。PCR反应
Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
。现在已经涉及到生命科学研究的各个领域，比如基因的差异表达分析，SNP 检测，等位基因的检测，药物开发，临床诊断，转基因研究等。 在 Real-time qPCR 技术的发展过程中，定量 PCR 仪的发展起了至关重要的作用。1995 年，美国 PE 公司（已经并入 Invitrogen 公司）成功研制了 Taqman 技术，1996 年推出了首台荧光定量 PCR 检测系统，通过检测每个循环的荧光强度，通过 Ct 值进行数据分析。从而荧光定量 PCR 获得广泛应用。现在的定量 PCR 仪有 ABI
进行标准化，预估扩增靶点的相对表达水平[1,2]。如今，终点 PCR 已基本被实时 PCR 或 qPCR 取代了，因为它们可获得更可靠和更准确的基因表达定量结果。 图 2：起始 cDNA 连续稀释液的 PCR 得率，通过在琼脂糖凝胶上对 PCR 产物染色进行可视化观察。 2.基因分型 PCR 可用于检测特定细胞或生物体中等位基因的序列差异。例如，基因敲除和敲入小鼠等转基因生物的基因分型[3]。引物对经设计位于目标区域侧翼，可根据是否存在扩增子及扩增子长度来检测遗传变异（图 3）。 图 3.PCR 用于
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