转基因构建PAT基因-35S终止子染料法qPCR试剂盒

转基因构建PAT基因-35S终止子染料法qPCR试剂盒产品特点:
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。
样品cDNA合成:
①反应体系
序号  反应物  剂量 1  逆转录buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆转录酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  总体积  10μl
透明质酸氨基葡糖苷酶3(HYAL3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Hyaluronoglucosaminidase 3 (HYAL3)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
透明质酸氨基葡糖苷酶2(HYAL2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Hyaluronoglucosaminidase 2 (HYAL2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
2-氨基双加氧酶(ADO)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for 2-Aminoethanethiol Dioxygenase (ADO)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
细胞附着蛋白3(CYTH3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Cytohesin 3 (CYTH3)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸激酶1(STYK1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Serine/Threonine/Tyrosine Kinase 1 (STYK1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
Prominin 2蛋白(PROM2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Prominin 2 (PROM2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
唾液酸酶4(SIAL4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Sialidase 4 (SIAL4)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
Atlastin 3蛋白(ATL3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Atlastin 3 (ATL3)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
Atlastin 2蛋白(ATL2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Atlastin 2 (ATL2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
Atlastin 1蛋白(ATL1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Atlastin 1 (ATL1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
嵌合蛋白1(CHN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Chimerin 1 (CHN1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
血小板亲和蛋白3(PKP3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Plakophilin 3 (PKP3)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
血小板亲和蛋白4(PKP4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Plakophilin 4 (PKP4)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
转基因构建PAT基因-35S终止子染料法qPCR试剂盒丙氨酸/丝氨酸/半胱氨酸/苏氨酸转运蛋白(ASCT1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Alanine/Serine/Cysteine/Threonine Transporter (ASCT1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
葡萄糖转运蛋白12(GLUT12)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Glucose Transporter 12 (GLUT12)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
葡萄糖转运蛋白10(GLUT10)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Glucose Transporter 10 (GLUT10)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
葡萄糖转运蛋白11(GLUT11)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Glucose Transporter 11 (GLUT11)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
葡萄糖转运蛋白7(GLUT7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Glucose 轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。

实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。