转基因构建OTP增强子-CrylA基因PCR试剂盒

转基因构建OTP增强子-CrylA基因PCR试剂盒实时定量PCR：
①β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释（加水27μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
②反应体系如下：
标准品反应体系
序号  反应物  剂量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  阳性模板上游引物F  0.5μl
3  阳性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  阳性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
基因反应体系：
序号  反应物  剂量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  内参照上游引物F  0.5μl
3  内参照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待测样品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
③制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃　2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。

P53诱导细胞凋亡抑制蛋白α抗体        
胞质5'核苷酸酶1A抗体        
NOC2家族样蛋白抗体        
硝基酪氨酸抗体        
核蛋白p8抗体        
神经内分泌特异性蛋白2抗体        
还原型辅酶Ⅱ氧化酶5/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸抗体        
核干细胞因子抗体        
尼曼匹克C1前体蛋白抗体        
去甲转运体抗体        
核孔复合体蛋白88抗体        
核仁蛋白8抗体        
NCK衔接蛋白2抗体        
肾小球裂孔膜蛋白PDCN抗体        
豆蔻酰基转移酶1抗体        
利钠肽受体A抗体        
神经调节蛋白3抗体        
神经前体细胞表达蛋白1抗体        
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶NEK1抗体        
N-乙酰转移酶8样蛋白抗体        
神经调节肽S抗体        
分子生物钟调控蛋白NOC抗体        
神经细胞粘附蛋白NGN抗体        
神经细胞引领蛋白Nav1抗体        
轴索过度生长抑制因子B受体抗体        
核受体0相关蛋白B家族2抗体        
转基因构建OTP增强子-CrylA基因PCR试剂盒磷酸化DNA修复蛋白NBS1抗体        
天冬氨酸蛋白酶ASP4抗体        
肉豆蔻酰基转移酶2-N端肽抗体        
核因子活化T细胞胞浆蛋白2抗体        
突触细胞粘附分子1抗体        
核孔糖蛋白P62抗体        
神经营养因子3抗体        
NEEP21蛋白抗体        
磷酸化谷氨酸受体2B抗体        
磷酸化谷氨酸受体2B抗体        
NADH氧化还原酶辅酶10抗体        
膜相关的蛋白质HEM2抗体        
跨膜受体蛋白Notch-2抗体        
磷酸化KB抑制蛋白β抗体        
磷酸化细胞核因子p50/k基因结合核因子抗体        
泛素样蛋白NEDD8抗体        
核因子1C型抗体        
磷酸化神经细胞正五聚体1抗体        
RNA结合蛋白NOB1抗体        
磷酸化T细胞激活核转录因子4抗体        
胆汁酸受体抗体        
NFKB激活蛋白抗体        
NLE1蛋白抗体        
磷酸化成酶3抗体        
磷酸合成酶3抗体        
磷酸化成酶3抗体        
增食欲素A/欲激素A抗体        
增食欲素A/欲激素A抗体        
2'-5'-寡腺苷酸合成酶3抗体        
牙齿发育相关蛋白Osr2抗体        
胚胎干细胞关键蛋白190抗体        
起始识别复合蛋白亚基1抗体        
泛素特异性蛋白酶Otubain2抗体        
PCR特异性：
1.primers design
这是重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些条件：
1)足够长，18～24bp，以保证特异性，当然，不是说越长越好，太长的primer同样会降低特异性，并且降低产量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中间序列要多GC，以增加稳定性；
4)避免3'端GCrich，个BASE不要有GC，或者5个有3个不要是GC。
5)避免3'端的互补，否则，容易造成DIMER；
6)避免3'端的错配；
7)避免内部形成二级结构；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值时不算，但在检测互补和二级结构要加上它们；
9)使用兼并primer时，要参考密码子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用较高的primer浓度(1μM～3μM)；
10)学会使用一种design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。 主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。