转基因构建OTP增强子-CrylA基因LAMP试剂盒

转基因构建OTP增强子-CrylA基因LAMP试剂盒产品特点:
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。
样品cDNA合成:
①反应体系
序号  反应物  剂量 1  逆转录buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆转录酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  总体积  10μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。

精神发育迟滞相关蛋白Oligophrenin-1抗体        
末端多聚腺苷酸2蛋白抗体        
口腔癌高表达的蛋白1抗体        
氧化固醇结合蛋白4抗体        
抗细胞凋亡蛋白OLFM44抗体        
结肠癌过度表达蛋白1抗体        
卵巢癌免疫反应抗原抗体抗体        
卵巢癌相关基因1抗体        
氧化应激诱导生长抑制因子1抗体        
氧化固醇结合蛋白8抗体        
泛素特异性蛋白酶OTB1抗体        
视神经萎缩相关蛋白1抗体        
鸟氨酸脱羧酶抗酶1抗体        
嗅觉受体家族5亚基1抗体        
胚胎干细胞关键蛋白抗体        
土霉素抗体        
肿瘤/睾丸抗原抗体117        
鸟氨酸脱羧酶抗酶2抗体        
鸟氨酸脱羧酶抗酶3抗体        
食欲素前体蛋白OX抗体        
纤维细胞源性蛋白        
鸟氨酸氨基甲酰转移酶抗体        
OS-9蛋白抗体        
精子尾部结构蛋白抗体        
磷酸化精子尾部结构蛋白抗体        
8-羟基鸟嘌呤DNA糖基化酶        
嗅觉受体家族10亚基J3抗体        
嗅觉受体家族2亚基4抗体        
嗅觉受体家族5亚基3抗体        
外致密纤维蛋白3B抗体        
骨钙蛋白/骨钙素抗体        
转基因构建OTP增强子-CrylA基因LAMP试剂盒固生蛋白3抗体        
肿瘤/睾丸抗原抗体135抗体        
骨诱导因子抗体        
八聚体结合转录因子6抗体        
少突胶质细胞转录因子2抗体        
水稻白叶枯病菌Os05g0477200蛋白抗体        
骨硬化病相关跨膜蛋白1抗体        
类粘蛋白2抗体        
胚胎干细胞关键蛋白抗体        
骨保护蛋白/护骨素抗体        
阳离子转运蛋白2抗体        
骨桥蛋白/分泌型磷蛋白1抗体        
骨桥蛋白抗体        
增食欲素A/欲激素A        
成骨相关转录因子抗体        
鸡卵白蛋白/卵清蛋白抗体        
丘脑分泌素受体1+2/食欲素受体1+2抗体        
阳离子转运器1抗体        
氧化低密度脂蛋白抗体        
骨钙蛋白/骨钙素抗体        
视神经病变诱导蛋白抗体        
胚胎干细胞关键蛋白2抗体        
胚胎干细胞关键蛋白1抗体        
衰老相关Sigma受体蛋白抗体        
有机溶质转运蛋白OSTβ抗体        
嗅球蛋白1抗体        
眼部白化病相关蛋白OA1/蛋白偶联受体143抗体        
癌基因蛋白抑瘤素M抗体        实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。