- 询价
- 上海一研
- 进口、国产
- EY-P964682
- 2025年07月15日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温冷藏
- 保质期：
详见说明书
- 英文名：
详见说明书
- 库存：
100
- 供应商：
上海一研
- 规格：
50T
①β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释（加水27μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
②反应体系如下：
标准品反应体系
序号 反应物 剂量
1 SYBR Green 1 染料 10μl
2 阳性模板上游引物F 0.5μl
3 阳性模板下游引物R 0.5μl
4 dNTP 0.5μl
5 Taq酶 1μl
6 阳性模板DNA 5μl
7 ddH2O 32.5μl
8 总体积 50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
基因反应体系：
序号 反应物 剂量
1 SYBR Green 1 染料 10μl
2 内参照上游引物F 0.5μl
3 内参照下游引物R 0.5μl
4 dNTP 0.5μl
5 Taq酶 1μl
6 待测样品cDNA 5μl
7 ddH2O 32.5μl
8 总体积 50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
③制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃ 2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。
PCR特异性：
1.primers design
这是重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些条件：
1)足够长，18～24bp，以保证特异性，当然，不是说越长越好，太长的primer同样会降低特异性，并且降低产量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中间序列要多GC，以增加稳定性；
4)避免3'端GCrich，个BASE不要有GC，或者5个有3个不要是GC。
5)避免3'端的互补，否则，容易造成DIMER；
6)避免3'端的错配；
7)避免内部形成二级结构；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值时不算，但在检测互补和二级结构要加上它们；
9)使用兼并primer时，要参考密码子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用较高的primer浓度(1μM～3μM)；
10)学会使用一种design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。
beta-Amyloid(35-42) β淀粉样肽/Aβ42抗体 0.1ml
ER α 雌激素受体α抗体 0.1ml
CKLFSF2/CMTM2 趋化素样因子超家族成员2抗体 0.2ml
COX7A2 细胞色素c氧化酶VIIA亚型2抗体 0.1ml
CKLFSF2 isoform 1 趋化素样因子超家族成员2亚型1抗体 0.2ml
MAP65/ASE 1 拟南芥MAP65蛋白抗体 0.2ml
Streptavidin/SA protein 链酶亲和素抗体 0.1ml
human Serum IgA 人血清型免疫球蛋白A抗体 0.2ml
ETFA 电子转移黄素蛋白α抗体 0.2ml
γ-taxilin/LSR5 脂多糖相关反应蛋白5抗体 0.2ml
T4/L-Thyroxine 甲状腺素T4抗体 0.2ml
HLA G(N-Terminus) 人类白细胞抗原G抗体（N端） 0.1ml
HLA G(C-terminal) 人类白细胞抗原G抗体（C端） 0.1ml
转基因构建hsp70-CrylAb基因染料法qPCR试剂盒hemagglutinin protein/H 麻疹病毒血凝素抗体 0.2ml
WIG-1/PAG608 野生型P53诱导基因1抗体 0.1ml
CD71/TFR/Transferrin receptor 转铁蛋白受体抗体 0.1ml
GAPDH(3E12)-Loading Control 3-磷酸甘油醛脱氢酶单克隆抗体(内参抗体) 0.1ml
GAPDH 3-磷酸甘油醛脱氢酶抗体(内参抗体) 0.1ml
beta-Actin (Loading Control) β-肌动蛋白抗体（内参抗体） 0.1ml
14-3-3(Alpha/Beta/Gamma/Delta/Epsilon) 14-3-3蛋白抗体 0.1ml
phospho-14-3-3 protein zeta/delta(Ser58) 磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗体 0.1ml
14-3-3 family protein 苹果14-3-3蛋白抗体(植物) 1ml
GLI1/Zfp5 脑胶质瘤相关蛋白抗体（锌指蛋白5） 0.1ml
Involucrin 囊包蛋白/内披蛋白抗体 0.2ml
human Fibrinogen 羊抗人纤维蛋白原抗体 0.1ml
S100B/S100 beta S100B蛋白抗体 0.2ml
GDF8 生长分化因子8/肌肉抑制素抗体 0.2ml
2,4-D 2，4-二氯苯氧乙酸(除草剂)抗体 0.2ml
2,4-D(24D1) 2，4-二氯苯氧乙酸(除草剂)单克隆抗体 0.1ml
eIF4EBP1/4EBP1 eIF4E结合蛋白抗体 0.1ml
phospho-eIF4EBP1/4EBP1(Ser64) 磷酸化4E结合蛋白1抗体 0.1ml
phospho-eIF4EBP1(Thr37/46) 磷酸化4E结合蛋白1抗体 0.1ml
phospho-eIF4EBP1/4EBP1(Ser65/Thr70) 磷酸化eIF4E结合蛋白抗体 0.1ml
phospho-EIF4EBP1(Ser100) 磷酸化eIF4E结合蛋白抗体 0.1ml
phospho-EIF4EBP1(Ser111) 磷酸化eIF4E结合蛋白抗体 0.1ml
EIF5 真核翻译起始因子5抗体 0.2ml
4EBP2 eIF4E结合蛋白2抗体 0.1ml
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。 主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验这两个条件我们才可以选择快速反应模式。而 Standard Mode 和 Fast Mode 的主要区别在于不同模式下仪器升降温速率不同，快速模式下升降温速度更快。下图列举了当前部分用于基因表达和基因分型的 Master Mix 所支持的反应模式，供大家参考（图 4）。另外针对当前使用较为广泛的体外诊断试剂盒，如新冠检测试剂盒，大家在运行模式选择时需要根据试剂盒说明书做相应的设置，保证实验设置与试剂盒说明书一致。 图 4 常见基因表达和基因分型 master mix 支持反应模式整理
荧光定量 PCR 的常见异常结果除了扩增曲线异常、融解曲线异常两类常见情况外，qPCR 实验中通常还会遇到以下三大类情况： 1. 复孔间重复性差怎么办？ 复孔间重复性差一般会有以下两种情况： （1）CT 值很大，如 CT≥ 30，重复性差属于正常现象。该现象符合泊松分布，即在有效模板量很少的情况下，模板与引物的碰撞存在随机性，直接导致复孔间的 CT 值差异较大。 解决方法：如果融解曲线没有杂峰，无模板阴性对照同目的基因的 △CT 值为 3 or 5 以上，那 CT 值为准确的，可多设置
Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
。现在已经涉及到生命科学研究的各个领域，比如基因的差异表达分析，SNP 检测，等位基因的检测，药物开发，临床诊断，转基因研究等。 在 Real-time qPCR 技术的发展过程中，定量 PCR 仪的发展起了至关重要的作用。1995 年，美国 PE 公司（已经并入 Invitrogen 公司）成功研制了 Taqman 技术，1996 年推出了首台荧光定量 PCR 检测系统，通过检测每个循环的荧光强度，通过 Ct 值进行数据分析。从而荧光定量 PCR 获得广泛应用。现在的定量 PCR 仪有 ABI
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
