转基因构建FMV启动子-PLRY基因探针法qPCR试剂盒

转基因构建FMV启动子-PLRY基因探针法qPCR试剂盒产品特点:
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
48T/96T    Homo sapiens (Human)
输入蛋白11(IPO11)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Importin 11 (IPO11)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
输入蛋白13(IPO13)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Importin 13 (IPO13)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
耐扭蛋白2A(TOR2A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Torsin 2A (TOR2A)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
白介素22受体(IL2R)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Interleukin 22 Receptor (IL22R)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
膜联蛋白A9(ANXA9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Annexin A9 (ANXA9)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
膜联蛋白A10(ANXA10)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Annexin A10 (ANXA10)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
膜联蛋白A7(ANXA7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Annexin A7 (ANXA7)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
膜联蛋白A13(ANXA13)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Annexin A13 (ANXA13)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
膜联蛋白A8(ANXA8)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Annexin A8 (ANXA8)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
Pannexin 1蛋白(PANX1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Pannexin 1 (PANX1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
Pannexin 2蛋白(PANX2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Pannexin 2 (PANX2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
Pannexin 3蛋白(PANX3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Pannexin 3 (PANX3)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
白介素1ζ(IL1ζ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Interleukin 1 Zeta (IL1z)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
白介素1ε(IL1ε)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Interleukin 1 Epsilon (IL1e)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
脱氧核糖核酸酶Ⅹ(DNASEⅩ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Deoxyribonuclease X (DNASEX)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
乙醇脱氢酶2(ADH2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Alcohol Dehydrogenase 2 (ADH2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
乙醇脱氢酶3(ADH3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Alcohol Dehydrogenase 3 (ADH3)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
乙醇脱氢酶4(ADH4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Alcohol Dehydrogenase 4 (ADH4)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
转基因构建FMV启动子-PLRY基因探针法qPCR试剂盒乙醇脱氢酶5(ADH5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Alcohol Dehydrogenase 5 (ADH5)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
乙醇脱氢酶6(ADH6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Alcohol Dehydrogenase 6 (ADH6)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
乙醇脱氢酶7(ADH7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Alcohol Dehydrogenase 7 (ADH7)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
分拣连接蛋白2(SNX2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Sorting 1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。
样品cDNA合成:
①反应体系
序号  反应物  剂量 1  逆转录buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆转录酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  总体积  10μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。

实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。