幼虫芽胞杆菌（美洲蜂幼虫腐臭病）PCR试剂盒

产品简介：
幼虫芽孢杆菌（Bacillus larvae）是引起美洲蜂幼虫腐臭病（American foul brood）的病原。美洲蜂幼虫腐臭病又名烂子病，是蜜蜂幼虫和蛹的一种 细菌性、急性、毁灭性病害。特征为病蜂的蜂盖子脾下陷、穿孔、封盖幼虫死 亡、蛹虫现象等。美洲蜂幼虫腐臭病最初发生于英国，以后传到欧美各国，截 止至 2011 年全世界均有发生。美洲蜂幼虫腐臭病不但危害性大，而且一旦发 生就很难根除。轻者影响蜂群繁殖和采集力，重者造成蜂群的覆灭，因此幼虫 芽孢杆菌快速检测具有重要的意义。本试剂盒根据 PCR 原理开发，它具有下列 特点：
1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增幼虫芽孢杆菌，跟其他微生物无交
叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。
6. 本产品只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
幼虫芽胞杆菌PCR 引物混合液	13-25440yw	100 μL（白盖）
幼虫芽胞杆菌PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	13-25440pc	50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂（试用装）	61202	20 次（1mL、绿盖）
使用手册	13-25440sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL 阳性对照的10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试 剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的天净沙核酸释放剂，本产品的裂解液可 以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
幼虫芽胞杆菌（PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（（超纯水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（幼虫芽胞杆菌PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	94℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	94℃	15 sec
	58℃	15 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 1106bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何 扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。