猴痘病毒PCR试剂盒

产品简介：
猴痘病毒(Monkey Pox Virus，MPV)会引起猴痘，是一种罕见的病毒性疾 病,主要发生于中部与西部非洲热带雨林国家。该病于 1958 年首次在丹麦哥本 哈根一实验室绿猴中发现,可引起实验用灵长类动物发病,许多非洲啮齿动物也 都有猴痘病毒感染。该病毒也可感染小鼠、大鼠和兔。1970 年刚果首次报告猴 痘病毒感染人类的病例。该病毒对人和动物健康造成较大损害，因此猴痘病毒 的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本公司开发了猴痘病毒的 PCR 检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增猴痘病毒，与其他病原没有交叉反
应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
猴痘病毒PCR 引物混合液	13-13600yw	100 μL（白盖）
猴痘病毒PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	60908-13600pc	50 μL（黄盖）
使用手册	13-13600sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout，其使用手册可以从本公 司网站搜索产品名称或产品编号 70701-50 下载。 2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 猴痘病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液而 得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上 待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
猴痘病毒PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（猴痘病毒PCR 阳性对照的 10000倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30sec
	55℃	30sec
	72℃	20 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 279bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。