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- 文献和实验
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- 保存条件:
‘-20℃保存
- 保质期:
有效期一年
- 库存:
30
- 供应商:
上海钰博生物科技有限公司
- 规格:
50次
| 编号 | 成分 | 十孔盒包装(去纸托) |
| 试剂一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黄盖) |
| 试剂二 | 成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白盖) |
| 试剂三 | 成分 PCR 阳性对照 | 50 uL(黄盖) |
| 试剂四 | 超纯水 | 1 mL(本色盖) |
| 试剂五 | DNA 释放剂试用装 | 50 次(成分见下) |
| 试剂六 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分一 | 50 uL(白盖) |
| 试剂七 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分二 | 100uL(绿盖) |
| 试剂八 | 免 DNA 提取试剂溶液 B | 400 uL(红盖) |
| 试剂九 | 使用手册 | 1 份 |
简并性引物对PCR扩增有无影响?
有影响。简并数量应尽量少。
通常一条引物中简并的碱基不要超过4处,如果简并的碱基数过多,则会造成反应体系中有效引物的量相对减少,此时应适当增加引物的使用量。但引物量过大,容易引起非特异扩增,应加以注意。
适合的模板添加量是多少?
根据基因组DNA、质粒DNA及反转录产物等模板种类不同,PCR反应的适合模板添加量也不同。 特别是使用PrimeSTAR® HS DNA Polymerase时,过剩的模板量有时会对PCR扩增产生阻害作用。 另外,使用PrimeSTAR® Max DNA Polymerase时,根据模板种类、模板使用量及模板质量可调整PCR反应条件。
使用PrimeSTAR® Max DNA Polymerase时,模板可按以下推荐量添加(50 μl反应体系):
· Human genomic DNA:5~200 ng
· E.coli genomic DNA: 100 pg~100 ng
· cDNA Library:1~200 ng
· λDNA:10 pg~10 ng
· 质粒DNA:10 pg~1 ng
PCR产物 (3‘端附有A碱基时) 经末端平滑后,克隆于去磷酸的平滑末端载体时,其PCR产物需不需要5′末端磷酸化?
需要。一般的PCR用引物5′末端都不带磷 (除非在引物合成时已特别标记)。使用这种引物进行PCR的PCR产物经末端平滑化后,与去磷酸的平滑末端载体连接之前,PCR产物必须进行5′末端磷酸化。
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