- ￥2490
- YBio/钰博生物
- YB13-766010
- 中国
- 2025年07月07日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Trypanosoma brucei brucei
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
50次
Trypanosoma brucei brucei
本试剂盒采用聚合酶链式反应（PCR）技术检测，可用于检测各种待检标本(如血液、粪便、食物、生物材料等)中所感染的特定细菌或病毒的某一特定基因，进而确定该细菌或病毒的感染/污染状态。试剂盒中所含引物能特异性扩增该细菌或者病毒的保守区域，不会交叉扩增细胞基因组。与传统的选择性培养基培养检测方法和免疫血清学检测方法相比较，本方法更为快速，特异性更高。
它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增布氏布氏锥虫序列，与其他没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
规格及成分：
| 成 份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL（红盖） |
| 超纯水 | 试剂二 | 1 mL（亮黄色） |
| 布氏布氏锥虫PCR 引物混合液 | 试剂三 | 100 μL（白盖） |
| 布氏布氏锥虫PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL） | 试剂四 | 50 μL（黄盖） |
| 使用手册 | ZY-99047 | 1份 |
运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是布氏布氏锥虫PCR 阳性对照的1000 倍稀释液，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：
成分 |
样品管 N+2 个 |
PCR 阴性对照 |
PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 布氏布氏锥虫PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | - | - |
| PCR 阴性对照（水） | - | 18 μL | - |
| PCR 阳性对照（布氏布氏锥虫PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液） | - |
- |
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 （35 个循环） |
95℃ | 15 sec |
| 57℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。 对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
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文献和实验作用从宿主获得营养。所有锥虫均可在体外连续培养。 锥虫是人和家畜重要的寄生虫之一。按其传播方式可分为两大类：①粪便型，通过被后循环锥虫污染的粪便传播;②唾液型,后循环锥虫经唾液腺传播。对人有严重致病作用的锥虫有：罗得西亚锥虫、冈比亚锥虫、枯氏锥虫等。前两者主要流行于非洲各地，引起所谓非洲睡眠病；后者主要分布在南美洲（特别是巴西），引起美洲锥虫病，即夏格氏病。中国至今还没有发现人体锥虫的病例。 对家畜有严重致病作用的锥虫有布氏锥虫、活泼锥虫、刚果锥虫、伊氏锥虫和马媾疫锥虫等。前三者
锥虫的感染，本文以伊氏锥虫kDNA片段为靶扩增DNA设计引物，确定最适PCR反应条件，建立kDNA片 段的PER扩增技术，应用直接扩增缓冲液(Ampdirect)从感染小鼠的 滤纸 血标本直接PER检测伊氏锥虫。 结果发现，PER扩增伊氏锥虫kDNA片段分子量为364 bp。能检测的最小DNA量是O．06 Pg，与布氏锥虫、 活动锥虫没有交叉反应。应用直接扩增缓冲液不需进行样本
不同，可逃避单一抗感染免疫。布氏锥虫和东非锥虫的表面糖蛋白基因数量多达l 000种以上，导致抗原的高度变异。溶组织内阿米巴、血吸虫幼虫和锥虫等还可失去其原有表面抗原，逃避免疫效应攻击。 ④抑制抗感染免疫效应：肺内血吸虫表面表达DAF样蛋白，抑制补体激活效应；枯氏锥虫合成DAF样膜糖蛋白，抑制补体活化；利什曼原虫前鞭毛体破坏补体MAC，逃避溶菌作用；刚地弓形虫抑制吞噬体与溶酶体的融合，枯氏锥虫溶解吞噬体膜逸人胞质等均可逃避Me的杀灭作用。某些蠕虫分泌胞外酶降解结合在虫体膜表面的抗体
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