
定点突变、定点插入或缺失细胞系定制
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- 2025年07月16日
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华腾生物长期致力于基因编辑领域,拥有经验丰富的专家团队,建立了基于优化的CRISPR/Cas9系统和TALEN技术的成熟稳定的基因编辑技术平台,可有效实现DNA定点突变尤其是大片段敲入,为客户提供定点突变、定点插入或缺失等细胞系的定制。
广州华腾生物医药科技有限公司提供以动物体内实验、药理药效非临床评价为核心的技术服务。公司的核心团队成员由药理毒理学、实验动物学、生物材料专业人员组成,可提供全方位的体内和体外非临床评价,以支持项目的 IND 注册。我们公司坚持以客户为中心,按照 CFDA 和 FDA 非临床研究技术指导原则制定综合解决方案来加速研发进程,节约研发成本。
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文献和实验Nat Methods:殷昊团队开发不依赖 DNA 供体高效靶向插入基因组的新方法:GRAND editing
大部分遗传疾病都存在基因缺失或者部分序列错误,靶向性基因插入是治疗疾病的最佳方案之一。如何高效定点插入大片段 DNA 序列也成为基因编辑领域的难点和热点。 利用 CRISPR 基因编辑技术进行靶向插入的经典方法主要是同源重组修复,这种方法通过提供一个外源 DNA 供体,利用细胞自身的同源重组修复机制实现外源 DNA 片段的插入1。由于同源重组修复过程主要发生在细胞有丝分裂的 S/G2 期,限制了在非分裂细胞中的应用。相较于同源重组介导的片段插入,利用非同源末端连接虽然可以在非
性酶切。 除了制备插入片段,PCR 也是一种在在克隆后筛选克隆是否携带目标插入片段的有效方法。引物经过设计,可以用于确定载体中插入片段是否存在和插入方向。 4.突变 PCR 克隆的一大优点是能够通过克隆将所需突变引入目的基因中,以便进行突变研究。在定点突变中,经过设计的 PCR 引物可将碱基置换、删除或插入整合到特定序列中。如图 5所示,引物定位到已克隆至质粒中的序列上。随后,含有引入突变的 PCR 产物通过自我连接,重新生成环状质粒,并用于转化感受态细胞。 图 5.PCR 用于定点突变。该方法使用非重叠
相关专题 Luciferase片段缺失实验 经检测发现多次裁切对荧光 素酶 表达量产生的影响相同(即检测组与空白组有明显差异,但各裁切的检测组间没有明显差异),故可推断转录调控位点应位于-282~近启动子端区域。 Luciferase定点突变 实验 对不同位点( 生物信息 学预测)分别进行点突变,LXRE2位点突变后的检测组与野生型的检测组间存在明显差异,而LXRE
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