YF®488 TUNEL 细胞凋亡试剂盒（绿色荧光）

自己翻译的罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书

Enhanced Substrate Set*DAB 金属增强底物* 或 POD 底物替代物 光镜镜检封固剂 信号转换 section3.4 湿盒 Parafilm 石蜡封 口膜或盖片 产品概述： 特异性：TUNEL 反应优先标记凋亡产生的 DNA 链断裂，从而辨别凋亡与坏死、以及由抑 制细胞生长的药物或放射线产生的 primary DNA 链断裂 实验干扰：假阴性：在某些型式的凋亡细胞中 DNA 链断裂可能缺失或不完全。空间位阻， 如细胞外元件可能阻止 TdT 到达

TUNEL 检测细胞凋亡原则及经验总结

的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型，绿色荧光)为例) TUNEL检测：使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min，再使用二甲苯脱蜡2次，每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，便于后期试剂能充分、均匀的结合反应

流式细胞仪检测细胞凋亡

膜的外侧。Annexin-V是一种35-36KD的钙粒子依赖的磷脂结合蛋白，它对PS具有较高的亲和力。细胞凋亡时，可以和外翻的PS结合，从而可以检测凋亡的细胞。发生死亡的细胞其细胞膜上的PS也外翻，因而也会阳性。因此，常用的凋亡试剂盒除了采用Annexin-V标记之外，还会加一种DNA染料，常用的有PI和7-AAD，由于死亡的细胞膜通透性增高，染料可以进入细胞内和DNA结合，从而可以发荧光，区分出死细胞。下图给出的是在使用FAS单抗诱导前后的检测结果，横坐标是Annexin-V FITC，纵坐标是PI