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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
HB101
- 保质期:
2-3年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
- 规格:
0.3mL甘油菌
存储条件
-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
无外源质粒 DNA 残留;
化学法转化效率≥107 cfu/μg pUC19 DNA。
使用方法
1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰浴中融化;
2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;
3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰浴中静置 2-3 min;
4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),后置于 37 ℃摇床复壮 45 min;
5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。
注意事项
1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用;
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;
3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;
4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。
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文献和实验Transformation of HB-101 Competent Cells
实验步骤 1. Thaw tubes of competent cells on ice, occasionally inverting gently to mix. 2. Pre-cool Falcon 2059 tubes on ice. 3. Aliquot 30 ul cells into each tube. 4. Add up to 10 ul DNA in TE or ligation
。 过氧化氢酶试验:滴加3% 过氧化氢试液,若菌落表面有气泡产生,为过氧化氢酶试验阳性,否则为阴性。本菌为阴性反应。 3、需购买试剂: 菌株 培养基及试剂 金黄色葡萄球菌 HB8278革兰氏染色液试剂盒、HB4117 兔血浆、HB0109-7营养琼脂培养基 大肠埃希氏菌 HBIG13 HBI大肠杆菌生化鉴定条、HB8280
要的作用力。2)可用更剧烈的方法来分离小质粒。在加入EDTA后,有时还在加入溶菌酶后让细菌暴露于去污剂,通过煮沸或碱处理使之裂解。这些处理可破坏碱基配对,故可使宿主的线状染色体DNA变性,但闭环质粒DNA链由于处于拓扑缠绕状态而不能彼此分开。当条件恢复正常时,质粒DNA链迅速得到准确配置,重新形成完全天然的超螺旋分子。 3)一些大肠杆菌菌株(如HB101的一些变种衍生株) 用去污剂或加热裂解时可释放相对大量的糖类,当随后用氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心进行质粒纯化时它们会惹出麻烦。糖类会在梯度
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