5X非还原蛋白上样缓冲液（含SDS,不含DTT）

献给初学者：手把手教你做免疫共沉淀实验

2～4 h，使抗体与 protein A 琼脂糖珠偶连； 免疫沉淀反应后，在 4 ℃ 以 3 000 rpm 速度离心 3 min，将琼脂糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼脂糖珠用 1 ml 裂解缓冲液洗 3～4 次；最后加入 15 μl 的 2 × SDS 上样缓冲液，沸水煮 5 分钟； SDS-PAGE，Western blotting 或质谱仪分析。 四、通过免疫共沉淀确定结合蛋白 用磷酸盐缓冲液洗 30 块 10 cm 培养板上的适宜

IPTG 诱导蛋白表达实验

℃ 继续培养3 -5h ;如果表达载体的原核启动子为tac 等,则37 ℃培养细菌数小时达到对数生长期后加IPTG 至终浓度为1 mmol / L.继续培养3 -5h . ( 5 )取上述培养液1 mL , 1000g 离心,1 min ,沉淀,加100 μL 聚丙烯酰胺凝胶电泳上样缓冲液后,作SDS -PAGE 检测. 2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白质纯化： 细菌的裂解 常用方法有：① 高温珠磨法;② 高压匀浆;③ 超声破碎法;④ 酶溶法;⑤ 化学

手把手教你做好体外 DNA 重组

.Na2,（pH8.0）2. 细菌裂解液: 0.2 mol/L NaOH，1% SDS3. 中和液: 60 mL 5M 醋酸钾，11.5 mL 冰醋酸，28.5 mL 双蒸水4. 3 mol/L NaAc (pH 5.2)5. TE 饱和酚 (pH8.0)6. 氯仿/异戊醇 = 24:17. RNase（20 mg/mL）【实验方法与步骤】（一）质粒的小量制备:1. 将 5 mL LB 培养液 (含筛选抗生素) 加入到容量为 15 mL 并通气良好的试管中，然后将转化菌的一个单菌落接种于培养