多聚HRP标记山羊抗兔抗体

一文理清免疫荧光实验流程和常见问题

免疫荧光（immunofluorescence）是一种常用的光学显微术，即用荧光显微镜来观察细胞中的特定生物分子。免疫荧光依赖于抗体抗原的特异性结合，然后通过直接标记或间接标记方法使用荧光分子指征抗体-抗原结合的位置，以确定目标生物分子在细胞中的位置、丰度和分布情况。   免疫荧光实验流程 1. 固定 固定液种类：有机溶剂（甲醇、乙醇、丙酮等）；交联剂（4%PFA、10%中性福尔马林），固定液的选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性。但针对磷酸化的抗体，不适合用甲醛，会导致磷酸

培养细胞的免疫酶标抗体染色法

培养细胞的免疫酶标抗体染色法       免疫酶组织化学技术是以酶作为抗原抗体反应的标记物，酶催化相应的  底物，形成一种不溶性的反应产物。光镜观察时，要求形成的终产物为不溶性的有色沉淀，  而电镜观察时，则要求酶反应的终产物经适当处理后，具有较高的电子密度。辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)是目前应用最多的酶标记物，具有稳定性强和酶反应特异性高等优点。         1)0．1mol／LPB(pH 7．2)配制的4％多聚甲醛原位固定(4℃

常用的免疫酶染色方法

PBST 漂洗，5min×3； *加HRP 标记的二抗室温孵育lh或37°C 30min ； *加0.01％H2O2~0.05％DAB显色 (显色液应新鲜配置)； *经PBS漂洗3次后，梯度酒精脱水，二甲苯透明，明胶甘油封片，显微镜观察。 （二）非标记抗体酶法 酶桥法 *首先用酶免疫动物，制备效价高、特异性强的抗酶抗体； *以二抗作桥，将抗酶抗体联结在一抗上； *再将酶结合在抗酶抗体上，经显色显示抗原的分布 -优点：任何抗体均未被酶标记。酶是通过免疫学原理与酶