首先,加入预稀释的校准品、质控品、样本和结合物(多克隆羊抗小鼠HRP内皮抑素)至微孔板条的微孔中。微孔板条的微孔用多克隆羊抗小鼠内皮抑素抗体预包被。校准品,质控品和样本中的内皮抑素与微孔中中预包被的抗体结合,与结合物中的检测抗体形成夹心,然后洗板。洗板时,将所有没有结合的无特异性材料清洗掉。接着,加入TMB底物至微孔中,底物的颜色直接与样本中出现的内皮抑素的数量成正比。该颜色变化可用标准的酶标仪读取。使用校准品中获得的值生成吸光度的剂量反应曲线 VS 校准品浓度。样本中的大/小鼠内皮抑素的浓度直接从剂量反应曲线读取。 典型的大/小鼠内皮抑素检测试剂盒(酶联免疫法)的校准曲线: