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文献和实验亲和层析原理 亲和层析是一种通过生物分子之间的特异性相互作用来分离物质的层析方法,如酶和底物、抗原与抗体等非常专一的相互作用 (图9)。配基被固定在填料上,可以结合相应的生物分子,再采用合适的方法如降低pH值、离子强度等,或添加和配基或者目的分子类似的基团,使目标分子以活性的形式被洗脱。 图9 亲和层析原理 特点 速度快,操作简单,可以快速将目标蛋白与大量杂质进行分离 特异性高,经常一步即可达到大于90%的纯度 配基种类繁多,填料选择性高 (包括纯化标签抗体蛋白、抗体、酶类、DNA结合
采用亲和加分子筛两种层析方法就能得到大量高纯度的蛋白样品往往是别人家的实验。到自己手上总会有各种惊喜… 今天的主角更加过分,在真正纯化之前就需要我们施展十八般武艺把它从细胞上「拽」下来。 没错,它就是膜蛋白… 人类基因组中,有大约 30% 的基因编码膜蛋白。当今已批准上市的药物中,有超过 50% 以膜蛋白为靶点,然而目前蛋白质结构数据库 (Protein Data Bank, PDB) 中膜蛋白比例不足 1%。 欲了解其功能,必解析其结构。是很多结构生物学家心头的念念不忘,随着冷冻
老话说的好,巧妇难为无米之炊,要做好标签蛋白质的纯化实验,首先得选择合适的填料和预装柱,以达到事半功倍的效果。我们今天就来看看 Cytiva 标签蛋白填料的大家族,一起 pick 最适合您蛋白质研究的填料吧! 蛋白标签(Protein Tag) 所谓蛋白标签(Protein Tag)是指利用 DNA 体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪、和纯化等。常用的标签有His、GST、Strep、MBP、Flag 和组合式的双标签。Cytiva 可为
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