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文献和实验粒细胞溶酶体弹性蛋白酶提取方法 溶酶体的提取: 粒细胞提取物(大约1.8×10E10个细胞)溶于500ml 0.2mol/L的蔗糖溶液(含有1mg/ml的heparin sulfate or 100 units/ml).在4℃搅拌24h或16h使细胞充分裂解。由于DNA的释放所得裂解液非常粘稠,而为离心造成困难。 消除方法有两种: 1、室温下加入外源DNAse I; 2、将混合物加热到37℃以内源DNAse除去DNA。 之后将裂解物在1000g离心10min
是转10秒~20秒,停10秒~20秒,可反复多次。 (2)物理法: 1) 反复冻融法:将待破碎的细胞冷至-15℃到-20℃,然后放于室温(或40℃)迅速融化,如此反复冻融多次,由于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎。 2) 超声波处理法:此法是借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器。破碎微生物细菌和酵母菌时,时间要长一些,处理的效果与样品浓度和使用频率有关。使用时注意降温,防止过热。 3) 压榨法:这是一种温和的、彻底破碎细胞的方法。在1000×105Pa~
彻底止血,仔细冲洗及清除凝血块、纤维素膜及坏死组织,以防管腔被堵。 [术后处理] 1.回病房后,立即将双管端各联接到灌洗液瓶和负压吸引器上[图1 ⑵],根据渗出液的粘稠度决定日灌洗液量3000~6000ml,然后算出每分钟平均灌洗量。术后24小时内渗血较多,应增加灌洗量。每日应加速呈水柱样灌洗3~4次,每次100ml,以免渗出物在管内凝固堵塞。冲洗液可混合高敏抗生素,常用0.5‰新霉素或氯霉素溶液,40万u‰青霉素液,16万u‰庆大霉素液。 2.定时更换冲洗
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