- ￥998
- Biorigin
- BN25270-10×0.5L
- 2025年11月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
4度
- 英文名：
SD/–Ade /–Trp with Agar
- 库存：
999
- 供应商：
Biorigin
- 规格：
10×0.5L
SD+缺陷型氨基酸-琼脂 双缺
一、酵母培养基种类及用途
一缺培养基
用于单质粒酵母转化筛选，外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交和酵母双杂交初始质粒转化。
二缺培养基
用于双质粒酵母转化筛选，外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交和酵母双杂交初始质粒转化免疫共沉淀，Y187、AH109/Y2HGold、NMY51 酵母杂交实验， 接合型二倍体筛选。
三缺培养基
用于双质粒酵母转化筛选和报告基因检测，外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互 补、酵母单杂交和双杂交报告基因检测，Y187、AH109/Y2HGold、NMY51 酵母交配实验后报 告基因分析（His3，Ade2)。
四缺培养基
用于报告基因分析，酵母双杂交和酵母三杂交报告基因检测，Y187、AH109/Y2HGold、NMY51 酵母交配实验后报告基因分析（His3，Ade2)。
五缺培养基
用于报告基因分析和表型分析，酵母三杂交报告基因检测(His3，Ade2)、酵母营养缺 陷型分离鉴定和表型分析。
六缺培养基
用于报告基因分析、表型分析和药物毒理分析，酵母三杂交报告基因检测、酵母营养缺 陷型分离鉴定和表型分析、药物毒理分析。
Rich medium
Rich medium 包括 YPD、YPDA、YPD Plus 系列培养基，也可以称为完全培养基。 YPD Medium 由精选的蛋白胨、酵母提取物和葡萄糖按适当比例混合组成；YPDA 培养基是 在 YPD 培养基中添加了适量的硫酸腺嘌呤；YPD Plus 相比于 YPDA 的营养更为丰富， 可直接用于酿酒酵母感受态的复苏，可以提高转化效率。YPD Agar、YPDA Agar 分别在 YPD、YPDA 基础上加入了 Agar，作为固体培养基倒板用。YPD 系列培养基用于酿酒酵母 的常规培养。
二、酵母培养基的配制
（1） Rich Liquid Media (Broth)
1. 取 50g 的 YPD/YPDA 加 1L 的去离子水中溶解；
2. 调节 pH 至 6.5，121℃高压灭菌 15min；
3. 避光、室温条件下储存灭菌培养基。
（2） Rich Plating Media with Agar
1. 取 70g 的 YPD Agar/YPDA Agar 加 1L 的去离子水中溶解（琼脂在高温灭菌后溶解）；
2. 调节 pH 至 6.5，121℃高压灭菌 15min；
3. 冷却到 50℃把培养基倒入平板中，室温使其凝固，封口膜封好后倒置保存在 4℃冰箱。
（3） Minimal SD Base
1. 在 1L 去离子水中加入 26.7g 的 Minimal SD Base，然后再加入相应量的缺陷氨基酸， 搅拌溶解；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 避光、室温条件下储存灭菌培养基。
（4） Minimal SD Agar Base
1. 在 1L 去离子水中加入 46.7g 的 Minimal SD Base，然后再加入相应量的缺陷氨基酸， 搅拌溶解；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 冷却到 50℃把培养基倒入平板中，室温使其凝固，封口膜封好后倒置保存在 4℃冰箱。
（5） DO（缺陷氨基酸）类培养基的配制
1. 在 1L 去离子水中加入相应量的 DO 培养基，然后再加入 26.7g Minimal SD Base，搅拌 溶解；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 4℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基。
或：1. 在 900ml 去离子水中加入相应量的 DO 培养基，然后再加入 6.7g YNB，搅拌溶解；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 4℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基；
4. 使用时再加入 100ml 已灭菌的 20%葡萄糖。
（6） SC（缺陷氨基酸+YNB）类培养基的配制
1. 在 1L 去离子水中加入相应量的 SC 培养基，然后再加入 20g 葡萄糖，搅拌溶解；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 4℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基；
或：1. 在 900ml 去离子水中加入相应量的 SC 培养基，搅拌溶解；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 4℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基；
4. 使用时再加入 100ml 已灭菌的 20%葡萄糖。
（7） SD（缺陷氨基酸+YNB+葡萄糖）类培养基的配制
1. 在 1L 去离子水中加入相应量的 SD 培养基，搅拌溶解；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 4℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基。
（8） SD with Agar（缺陷氨基酸+YNB+葡糖糖+Agar）类培养基的配制
1. 在 1L 去离子水中加入相应量 SD with Agar 培养基，搅拌溶解（琼脂在高温灭菌后溶解）；
2. 调节 pH 至 5.8，121℃高压灭菌 15min；
3. 冷却到 50℃把培养基倒入平板中，室温使其凝固，封口膜封好后倒置保存在 4℃冰箱。
注意事项：
1. 在配制酵母缺陷培养基时，培养基会变色，由浅黄到深褐色不等，对酵母的生长不会产 生严重影响。
2. DO 类和 SC 类培养基均不含葡萄糖。葡萄糖高温灭菌会有碳化现象，控制好灭菌温度和时间，葡萄糖的微量碳化对实验并无太大影响。如有特殊要求可将 20%葡萄糖单独灭菌，待使用时再加入。
3. 缺陷培养基的 PH 值在 5.5-6.5 范围内都是比较适合酵母生长的，此类试剂粉末的 PH 已 经过调试，使用时只需要稍微调整即可。
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文献和实验1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办? 在某些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1 ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板，在30 ℃下温浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5 ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆，并收集到一管中，这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。 2.如果诱饵蛋白能直接激活报告
法将cDNA 文库质粒转化到酵母菌Y187中，SD – Leu平板上30 ℃培养3～5 天，菌落长出。 5.酵母交配转化及阳性克隆的筛选 将酵母菌Y187/ pGADT7-cDNA与酵母菌Y2HGold/pGBKT7- CaM进行酵母交配转化(Yeast Mating)，SD–Trp/-Leu/Aba/X-α-gal平板上30 ℃培养3～5 天，筛选蓝色菌落，再将阳性克隆在SD–Trp/-Leu/-His/-Ade/Aba/X-α-gal平板上进行验证
，然后重新检测其是否自激活，但要注意重组也有可能破坏蛋白之间的互作。3.转化效率太低怎么办？可以采用以下方法解决：1)检测一下DNA的纯度，如果可以的话，重新用乙醇纯化。2)DNA-BD/诱饵蛋白很可能是有毒的。3)不适当的培养基，重新配制培养基，并做对照转化。4)检测pGBT9对照载体的转化效率，放置于SD/–Trp平板上，转化效率应该在1 x105 colonies/mg DNA以上。4.杂交效率不高，该如何处理？在杂交中，预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养过夜时，应挑选
