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浙江羽翔生物科技有限公司
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文献和实验灭活内源性酶及封闭内源性生物素 在生物体组织内均含有一定量的内源性酶和内源性生物素,如富含血细胞的组织标本有大量具有活性的过氧化物酶,肝、脾、肾、脑及胚胎组织中富含生物素。 如采用过氧化物酶检测系统或碱性磷酸酶和NBT/BCIP显色系统进行免疫组织化学染色时.酶的作用是催化底物,使显色剂显色,而组织中的内源性酶同样也能催化底物,使其显色,这就影响免疫组织化学染色的特异性。在使用亲和素试剂的免疫组织化学染色中,内源性生物素易结合亲和素,形成亲和素一生物素复合物,导致假阳
是不是做 Western 的时候,会遇到这样的情况呢?没错,就是背景很脏。造成背景脏的原因有很多,比如一抗没洗干净,或者二抗没洗干净,还有就是封闭的时候不完全。但其实,封闭液也是你们很容易忽略的一个环境哈。封闭液有几种?除了脱脂奶粉和 BSA 还有啥你们能想到的?第一种封闭液就是脱脂奶粉,这是异常便宜的封闭液品种,当然也应该是你们最常用的封闭液配方了。(甚至我们用过特仑苏)但是,你们应该注意到的是,脱脂奶粉中有大量的生物素,也就是说你做的蛋白要是用生物素标记的,一抗也是抗生物素的。那用脱脂
。 7. 光漂白 减少照明强度/时间。 选用抗荧光淬灭封片剂。 二、背景太高了怎么办? 大家在操作时可以通过设置对照,帮助我们迅速判断背景的来源。对照包括自发荧光对照(无一抗、二抗)和无一抗对照。 1. 封闭不足 选用二抗种属来源的血清封闭。 选用链霉亲和素/生物素系统,需要用链霉亲和素封闭内源的生物链酶。 选用HRP系统,需要使用过氧化氢等商业化试剂盒去活化内源性HRP。 选用AP系统,需要使用左旋咪唑等商业化试剂去活化内源性
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